[發(fā)明專利]一種NZW/LacJ狼瘡鼠脾淋巴細(xì)胞激素耐藥模型及其建立方法

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• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201810469136.5
• 申請(qǐng)日: 2018-05-16
• 公開（公告）號(hào): CN108624558A
• 公開（公告）日: 2018-10-09
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 魯盈
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 浙江省中醫(yī)藥研究院
• 主分類號(hào): C12N5/078
• 分類號(hào): C12N5/078;C12Q1/02
• 代理公司: 杭州豐禾專利事務(wù)所有限公司 33214
• 代理人: 王曉峰

1.一種NZW/LacJ狼瘡鼠脾淋巴細(xì)胞激素耐藥模型，其特征在于：該NZW/LacJ狼瘡鼠脾淋巴細(xì)胞激素耐藥模型由NZW/LacJ狼瘡鼠脾淋巴細(xì)胞用注射用甲基強(qiáng)的松龍干預(yù)獲得。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種NZW/LacJ狼瘡鼠脾淋巴細(xì)胞激素耐藥模型，其特征在于：所述注射用甲基強(qiáng)的松龍的濃度為0.1～4μg/ml。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種NZW/LacJ狼瘡鼠脾淋巴細(xì)胞激素耐藥模型，其特征在于：所述注射用甲基強(qiáng)的松龍的濃度為2～4μg/ml。

4.一種如權(quán)利要求1～3所述的NZW/LacJ狼瘡鼠脾淋巴細(xì)胞激素耐藥模型的建立方法，其特征在于：該方法包括如下步驟：

1)分離NZW/LacJ狼瘡鼠脾淋巴細(xì)胞；

2)將NZW/LacJ狼瘡鼠脾淋巴細(xì)胞進(jìn)行注射用甲基強(qiáng)的松龍干預(yù)；

3)培養(yǎng)、分離。

5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的NZW/LacJ狼瘡鼠脾淋巴細(xì)胞激素耐藥模型的建立方法，其中，所述步驟3)中的培養(yǎng)條件為：30℃～40℃，2～5％二氧化碳濃度，培養(yǎng)24～72小時(shí)。

6.根據(jù)權(quán)利要求4所述的NZW/LacJ狼瘡鼠脾淋巴細(xì)胞激素耐藥模型的建立方法，其中，所述步驟3)中的分離方法為：將培養(yǎng)的淋巴細(xì)胞從多孔板轉(zhuǎn)入離心管離心，棄培養(yǎng)基；PBS重懸，離心，洗細(xì)胞。

7.根據(jù)權(quán)利要求4所述的NZW/LacJ狼瘡鼠脾淋巴細(xì)胞激素耐藥模型的建立方法，其中：所述步驟1)中的NZW/LacJ狼瘡鼠脾淋巴細(xì)胞的獲取方法如下：

1)斷頸處死小鼠，浸泡于乙醇中；

2)在培養(yǎng)皿中放入Mouse1×淋巴細(xì)胞分離液，取用前搖勻；在超凈臺(tái)中取出小鼠脾臟；放入尼龍網(wǎng)中，并浸入含淋巴細(xì)胞分離液的培養(yǎng)皿中；

3)用1ml玻璃注射器芯輕輕研磨，直至肉眼見僅余白色結(jié)締組織；

4)把懸有脾臟細(xì)胞的分離液立即轉(zhuǎn)移到離心管中，覆蓋200-500μL的1640培養(yǎng)基，保持液面分界明顯；

5)室溫，離；離心結(jié)束后細(xì)胞分層：最上層為培養(yǎng)基覆蓋層，接著為淋巴細(xì)胞層，再往下為淋巴細(xì)胞分離液層，最下層為紅細(xì)胞、其他細(xì)胞及細(xì)胞碎片；

6)吸出淋巴細(xì)胞層，再加入1640培養(yǎng)基，顛倒洗滌；室溫，離心收集細(xì)胞；

7)傾倒上清液，用無(wú)血清培養(yǎng)基重懸細(xì)胞；

8)細(xì)胞懸液，加入PBS中，加入臺(tái)盼蘭，計(jì)數(shù)細(xì)胞。

8.如權(quán)利要求1～3所述的NZW/LacJ狼瘡鼠脾淋巴細(xì)胞激素耐藥模型在篩選逆轉(zhuǎn)激素耐藥藥物中的應(yīng)用。