[發明專利]Ogura CMS不育恢復基因RfoB

有效

• 申請號: 201810468233.2
• 申請日: 2018-05-16
• 公開（公告）號: CN108642061B
• 公開（公告）日: 2021-10-08
• 發明（設計）人: 宋洪元;杜楊梅;徐冰冰;李勤菲;任雪松;司軍
• 申請（專利權）人: 西南大學
• 主分類號: C12N15/29
• 分類號: C12N15/29;C07K14/415;C12N15/82;A01H5/00;A01H6/20
• 代理公司: 重慶華科專利事務所 50123
• 代理人: 康海燕

本發明涉及基因工程領域領域，具體涉及恢復基因Rfo^B、其表達載體及其應用。Rfo^B是以甘藍Ogura CMS細胞質不育系為對象，根據恢復基因Rfo序列，結合甘藍基因密碼子偏好性，人工合成新的Rfo^B序列；將PRfo啟動子，Rfo^B基因以及終止子E9?T融合獲得Rfo^B基因表達盒。構建其植物表達載體后利用農桿菌介導法直接轉化甘藍Ogura CMS細胞質不育系，獲得甘藍轉基因植株，其育性恢復，轉基因植株自交正常結籽，其作為父本導入其他甘藍類Ogura CMS細胞質不育系后，攜帶Rfo^B基因的個體均能恢復育性。

技術領域

本發明涉及基因工程領域領域，具體涉及人工合成的Ogura CMS細胞質雄性不育恢復基因Rfo^B、Rfo^B植物表達載體及其在Ogura CMS細胞質雄性不育恢復系創建中的應用。

背景技術

目前，在蕓苔屬植物中被廣泛使用的Ogura CMS細胞質雄性不育于1968年在日本鹿兒島的蘿卜中發現(Ogura H.Studies on the new male-sterility in Japaneseradish,with special reference to the utilization of this sterility towardsthe practical raising of hybrid seeds.Mem Fac Agric Kagoshima Univ,1968，6：39–78)，不育性狀主要由線粒體上的orf138基因所控制(Bonhomme S,Budar F,Lancelin D,Small I,Defrance MC,and Pelletier G.Sequence and transcript analysis of theNco2.5-specific fragment correlated with cytoplasmic male sterility inBrassica cybrids.Mol Gen Genet，1992，235:340–348)。orf138基因表達產物具有細胞毒性，通過影響花藥絨氈層細胞線粒體活性而導致不育。后來，通過遠緣雜交、胞質非對稱融合等手段，將其線粒體先后轉移到油菜、甘藍類蔬菜等植物中，獲得穩定的細胞質雄性不育系，并廣泛應用于雜種一代的品種選育(Pelletier G，Primard C，Vedel F，Chetrit,RemyR,Rousselle,Renard M.Intergeneric cytoplasmic hybridization in Cruciferae byprotoplast fusion.Mol Genet Genomics，1983，191(2):244-250；方智遠，劉玉梅，楊麗梅，王曉武，莊木，張揚勇，孫培田.甘藍顯性核基因雄性不育與胞質雄性不育系的選育及制種.中國農業科學，中國農業科學2004,37(5):717-723)。

甘藍類蔬菜包括結球甘藍、花椰菜、青花菜、抱子甘藍、芥藍、羽衣甘藍、球莖甘藍等不同變種，隨著Ogura CMS細胞質雄性不育導入不同甘藍類蔬菜，越來越多的甘藍類蔬菜采用Ogura CMS細胞質雄性不育選育雜種一代(張艷王小佳李成瓊宋洪元任雪松司軍.甘藍細胞質雄性不育材料分子鑒定及花器官形態對核背景的響應.園藝學報，2010，6：915-922)。由于Ogura CMS細胞質雄性不育基因位于細胞質內，所有可育材料與其雜交后得到的后代均為100％不育，因此，位于不育材料(品種)中的優異性狀無法被分離出來與其他優異性狀進行組合而被再利用，其實質是對優異種質資源的再利用形成了技術封鎖，對甘藍類蔬菜優異育種材料的創新具有明顯的阻礙作用。因此，有必要針對Ogura CMS細胞質雄性不育系選育專門的恢復系。然而，到目前為止，仍沒有針對Ogura CMS細胞質雄性不育的甘藍類蔬菜恢復系被報道。