[發明專利]一種消化液的制備方法

有效

• 申請號: 201810467929.3
• 申請日: 2018-05-16
• 公開（公告）號: CN108342359B
• 公開（公告）日: 2021-04-13
• 發明（設計）人: 王誠;陸曉青;余美文;侯傳玲;姚育英;孫愛靜
• 申請（專利權）人: 紹興市人民醫院
• 主分類號: C12N5/09
• 分類號: C12N5/09
• 代理公司: 紹興市知衡專利代理事務所(普通合伙) 33277
• 代理人: 施春宜

本申請涉及一種消化液的制備方法，屬于測試用樣品制備技術領域。稱取EDTA粉末溶于PBS中，在配置時調整溶液pH適宜，攪拌均勻，配置EDTA母液；分別稱取胰蛋白酶和蛋白酶K，溶解于PBS溶液中后，將其按比例滴入EDTA母液，根據需要補充滴加PBS即可，所形成的消化液包括以下濃度的各組分：蛋白酶K 0.1?2mg/ml，胰蛋白酶1?100mg/ml，EDTA 0.1?2mg/ml。將本申請應用于腫瘤淋巴結組織標本處理，特別是結合固定液以及酸、堿處理過的腫瘤淋巴結根治標本，加大脂肪組織和淋巴結軟硬度差，方便淋巴結取材，有效提高了淋巴結檢出數目和精確淋巴結轉移陽性率。

技術領域

本申請涉及一種消化液的制備方法，屬于測試用樣品制備技術領域。

背景技術

現有腫瘤淋巴結清掃離體組織標本通常是在福爾馬林固定液中浸泡，這主要由于甲醛可以長時間并且很好的保存組織形態學結構特征，同時又具有良好的經濟效用。此類標本處理方法雖然可以很好的固定組織的形態，但也使含有脂肪組織的標本變硬，在病理科取材特別是淋巴結取材時大大增加了難度。腫瘤淋巴結清掃離體組織標本中，徹底地淋巴結取材對腫瘤診斷分期、制定治療方案及判斷預后至關重要，而常規的固定液和現有的標本固定方法都無法滿足在快速固定的同時提高淋巴結的取材速度和檢出率，使得病理醫生在長期的離體脂肪組織中手摸刀切式尋找淋巴結的方法存在取材不充分、操作時間長等諸多弊端，并最終影響病人的治療方案、預后和轉歸。為解決現有腫瘤淋巴結清掃離體組織標本處理技術中存在的問題，臨床實際工作中急需軟化或者溶解脂肪的同時充分暴露和固定淋巴結、保持淋巴結組織結構和細胞形態完整的方法。

基于此，做出本申請。

發明內容

針對現有淋巴結檢出技術所存在的上述缺陷，本申請提供一種全新的固定脂肪消化液的制備方法，在消化和液化脂肪的同時，加大脂肪組織和淋巴結軟硬度差，方便淋巴結取材。

為實現上述目的，本申請采取的技術方案如下：

一種消化液的制備方法，稱取EDTA粉末溶于PBS中，在配置時調整溶液pH適宜，攪拌均勻，配置EDTA母液；分別稱取胰蛋白酶和蛋白酶K，溶解于PBS溶液中后，將其按比例滴入EDTA母液，根據需要補充滴加PBS即可，所形成的消化液包括以下濃度的各組分：蛋白酶K0.1-2mg/ml，胰蛋白酶1-100mg/ml，EDTA 0.1-2mg/ml。

進一步的，作為優選：

具有上述特征的消化液還可以溶解于兩種緩沖液中：

一種是PBS緩沖液，pH7.4，主要作用是緩沖和維持反應體系的pH值及鹽離子濃度。根據需要，還可以加1-10mM CaCl₂穩定酶活性所需雙價陽離子。

另一種是pH7.5 50mMTris-HCl緩沖液，還可加1-10mM CaCl₂，配制方法是6克的Tris-Base加水至900ml，用HCl調至pH7.5，還可以加CaCl₂至終濃度10mM。Tris主要作用是緩沖和維持反應體系的pH值及鹽離子濃度,CaCl₂穩定酶活性所需雙價陽離子。所述消化液中，各組分的濃度分別為：蛋白酶K 0.5mg/ml，胰蛋白酶25mg/ml，EDTA1mg/ml。

將上述方法應用于腫瘤淋巴結離體標本的固定處理，其優點主要體現為：

(1)本申請所提供的消化液，是具有消化和液化脂肪等作用的混合液，用于依次經“軟脂固定液”固定、酸和堿處理過腫瘤淋巴結根治標本，能進入脂肪細胞發揮消化脂肪作用，可軟化及液化經“軟脂固定液”固定處理的標本，而淋巴結因表面致密結締組織被膜固定保護而不受影響或影響輕微。

(2)組織標本先上述消化液處理后，加大了脂肪組織和淋巴結之間的軟硬度差，方便淋巴結取材，提高了工作效率和工作質量，也減少了病理科醫生的解剖取材時間，為后期病理學科的室外質量控制提供了可能。