[發明專利]一種消化液的制備方法

有效

• 申請號: 201810467929.3
• 申請日: 2018-05-16
• 公開（公告）號: CN108342359B
• 公開（公告）日: 2021-04-13
• 發明（設計）人: 王誠;陸曉青;余美文;侯傳玲;姚育英;孫愛靜
• 申請（專利權）人: 紹興市人民醫院
• 主分類號: C12N5/09
• 分類號: C12N5/09
• 代理公司: 紹興市知衡專利代理事務所(普通合伙) 33277
• 代理人: 施春宜

1.一種消化液在腫瘤淋巴結清掃離體組織標本消化和液化脂肪中的應用，其特征在于，所述消化液由以下濃度比的各組分構成：蛋白酶K 0.5mg/ml，胰蛋白酶25mg/ml，EDTA0.1mg/ml；所述標本為依次經固定液固定、酸和堿處理過的腫瘤淋巴結根治標本，所述固定液由以下濃度比的各組分構成：甲醛100ml/L，卵磷脂50g/L，無水乙醇250ml/L，丙酮250ml/L，去氧膽酸47.5g/L，甲醇250ml/L，PBS溶液1×，美蘭0.1g/L。

2.根據權利要求1所述的一種消化液在腫瘤淋巴結清掃離體組織標本消化和液化脂肪中的應用，其特征在于：消化液中還含有緩沖液，所述緩沖液為pH為7.5的Tris-HCl。

3.根據權利要求1所述的一種消化液在腫瘤淋巴結清掃離體組織標本消化和液化脂肪中的應用，其特征在于：消化液中還含有緩沖液，所述緩沖液為pH為7.4的PBS。

4.根據權利要求3所述的一種消化液在腫瘤淋巴結清掃離體組織標本消化和液化脂肪中的應用，其特征在于：所述消化液的制備方法為：稱取EDTA粉末溶于PBS中，在配置時調整溶液pH適宜，攪拌均勻，配置EDTA母液；分別稱取胰蛋白酶和蛋白酶K，溶解于緩沖液中后，將溶解得到的酶緩沖液按比例滴入EDTA 母液，根據需要補充滴加PBS即可。

5.根據權利要求1-4任一項所述的一種消化液在腫瘤淋巴結清掃離體組織標本消化和液化脂肪中的應用，其特征在于：所述消化液中還添加有CaCl₂，所述CaCl₂添加量為1-10mM。

6.一種腫瘤淋巴結清掃離體組織標本消化和液化脂肪的方法，其特征在于，標本依次經過如下處理：

(1)用固定液在室溫下處理3小時；(2)用0.1N HCl/PBS溶液室溫處理1小時；(3)用0.1NNaOH/PBS溶液室溫處理1小時；(4)用消化液37℃水浴處理4小時；

所述固定液由以下濃度比的各組分構成：甲醛100ml/L，卵磷脂50g/L，無水乙醇250ml/L，丙酮250ml/L，去氧膽酸47.5g/L，甲醇250ml/L，PBS溶液1×，美蘭0.1g/L；

所述消化液由以下濃度比的各組分構成：蛋白酶K 0.5mg/mL，胰蛋白酶25mg/mL，EDTA0.1mg/mL。

7.根據權利要求6所述的一種腫瘤淋巴結清掃離體組織標本消化和液化脂肪的方法，其特征在于：消化液中還含有緩沖液，所述緩沖液為pH為7.5的Tris-HCl。

8.根據權利要求6所述的一種腫瘤淋巴結清掃離體組織標本消化和液化脂肪的方法，其特征在于：消化液中還含有緩沖液，所述緩沖液為pH為7.4的PBS。

9.根據權利要求8所述的一種腫瘤淋巴結清掃離體組織標本消化和液化脂肪的方法，其特征在于，所述消化液的制備方法為：稱取EDTA粉末溶于PBS中，在配置時調整溶液pH適宜，攪拌均勻，配置EDTA母液；分別稱取胰蛋白酶和蛋白酶K，溶解于緩沖液中后，將溶解得到的酶緩沖液按比例滴入EDTA 母液，根據需要補充滴加PBS即可。

10.根據權利要求6-9任一項所述的一種腫瘤淋巴結清掃離體組織標本消化和液化脂肪的方法，其特征在于：所述消化液中還添加有CaCl₂，所述CaCl₂添加量為1-10mM。