[發(fā)明專利]腫瘤關(guān)聯(lián)糖蛋白-72免疫層析電化學(xué)檢測(cè)試劑盒及制法

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• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201810457630.X
• 申請(qǐng)日: 2018-05-14
• 公開（公告）號(hào): CN108896764A
• 公開（公告）日: 2018-11-27
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 孫喜元
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 蘇州承美生物科技有限公司
• 主分類號(hào): G01N33/574
• 分類號(hào): G01N33/574;G01N33/532;G01N33/543
• 代理公司: 北京科家知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 11427
• 代理人: 陳娟

1.腫瘤關(guān)聯(lián)糖蛋白-72免疫層析電化學(xué)檢測(cè)試劑盒，其特征在于，所述試劑盒包括：腫瘤關(guān)聯(lián)糖蛋白-72檢測(cè)試紙條，所述腫瘤關(guān)聯(lián)糖蛋白-72檢測(cè)試紙條包含亞甲基藍(lán)標(biāo)腫瘤關(guān)聯(lián)糖蛋白-72抗體墊(1)、樣品墊(2)、C線(3)和T線(4)，所述C線(3)和T線(4)劃線或點(diǎn)樣于硝酸纖維素膜(5)上不同位置，所述硝酸纖維素膜(5)粘貼于底板(6)上，所述底板(6)一端粘貼加厚吸水紙(7)，所述底板(6)另一端粘貼有所述亞甲基藍(lán)標(biāo)記腫瘤關(guān)聯(lián)糖蛋白-72抗體墊(1)和樣品墊(2)，所述腫瘤關(guān)聯(lián)糖蛋白-72檢測(cè)試紙條還包含工作電極(8)、參比電極(9)、輔助電極(10)貼片貼合于硝酸纖維素膜上T線(4)抗體區(qū)。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的腫瘤關(guān)聯(lián)糖蛋白-72免疫層析電化學(xué)檢測(cè)試劑盒，其特征在于，所述腫瘤關(guān)聯(lián)糖蛋白-72免疫層析電化學(xué)檢測(cè)試劑盒還包括反應(yīng)溶液，樣本稀釋溶液，清洗液。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的腫瘤關(guān)聯(lián)糖蛋白-72免疫層析電化學(xué)檢測(cè)試劑盒，其特征在于，所述亞甲基藍(lán)偶聯(lián)腫瘤關(guān)聯(lián)糖蛋白-72抗體墊(1)由亞甲基藍(lán)偶聯(lián)腫瘤關(guān)聯(lián)糖蛋白-72抗體、抗體墊結(jié)合稀釋液和玻璃纖維素膜制成。

4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的腫瘤關(guān)聯(lián)糖蛋白-72免疫層析電化學(xué)檢測(cè)試劑盒，其特征在于，所述亞甲基藍(lán)偶聯(lián)腫瘤關(guān)聯(lián)糖蛋白-72抗體中亞甲基藍(lán)和腫瘤關(guān)聯(lián)糖蛋白-72的摩爾比為5:1～50:1。

5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的腫瘤關(guān)聯(lián)糖蛋白-72免疫層析電化學(xué)檢測(cè)試劑盒，其特征在于，所述抗體墊結(jié)合稀釋液包含：PBS、蔗糖、海藻糖、BSA、PVP、表面活性劑和NaN₃，所述PVP質(zhì)量濃度范圍：0.5％～10％，所述表面活性劑濃度范圍：0.5％～5％。

6.根據(jù)權(quán)利要求6所述的腫瘤關(guān)聯(lián)糖蛋白-72免疫層析電化學(xué)檢測(cè)試劑盒，其特征在于，所述反應(yīng)液包含：濃度為0.1～10mM三氯化六銨合釕、濃度為0.1～20mM三(2-羧乙基)膦鹽酸鹽。

7.腫瘤關(guān)聯(lián)糖蛋白-72免疫層析電化學(xué)檢測(cè)試劑盒制備方法，其特征在于，方法包括如下步驟：

亞甲基藍(lán)標(biāo)腫瘤關(guān)聯(lián)糖蛋白-72抗體墊的制備；

層析試紙條C線與T線的制備；

層析試紙條的組裝。

8.根據(jù)權(quán)利要求8所述的腫瘤關(guān)聯(lián)糖蛋白-72免疫層析電化學(xué)檢測(cè)試劑盒制備方法，其特征在于，所述亞甲基藍(lán)標(biāo)腫瘤關(guān)聯(lián)糖蛋白-72(TAG-72)抗體墊的制備方法為：

將腫瘤關(guān)聯(lián)糖蛋白-72抗體和DMSO溶解亞甲基藍(lán)-琥珀酰亞胺酯加入3ml 0.02M MES(PH 8.0)，4℃輕輕搖晃過夜；標(biāo)記抗體裝入分子量10000D的透析袋，4℃在PBS溶液中透析4h，用截留分子量30000D的超濾管離心濃縮，用保存液收集，4℃保存；將保存的亞甲基藍(lán)標(biāo)記腫瘤關(guān)聯(lián)糖蛋白-72抗體用墊結(jié)合稀釋液按1：4稀釋，鋪于玻璃纖維素膜，真空干燥后密封保存。

9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的腫瘤關(guān)聯(lián)糖蛋白-72免疫層析電化學(xué)檢測(cè)試劑盒制備方法，其特征在于，所述層析試紙條C線與T線的制備方法為：將羊抗鼠IgG抗體稀釋成1mg/ml、腫瘤關(guān)聯(lián)糖蛋白-72鼠單克隆抗體稀釋成1mg/ml別劃線或點(diǎn)樣于硝酸纖維素膜上不同位置，C線為羊抗鼠IgG線，T線為腫瘤關(guān)聯(lián)糖蛋白-72鼠單克隆抗體線，于37度干燥2-3小時(shí)，密封保存。

10.根據(jù)權(quán)利要求8所述的腫瘤關(guān)聯(lián)糖蛋白-72免疫層析電化學(xué)檢測(cè)試劑盒制備方法，其特征在于，所述層析試紙條的組裝方法為：

將含C線、T線的硝酸纖維素膜粘貼于底板中間，底板一端粘貼加厚吸水紙，另一端粘貼上制作好的亞甲基藍(lán)標(biāo)記腫瘤關(guān)聯(lián)糖蛋白-72抗體墊和樣品墊，切條機(jī)切成所需大小試紙條，將工作電極、參比電極、輔助電極貼片貼合于NC膜T線腫瘤關(guān)聯(lián)糖蛋白-72抗體區(qū)，壓卡機(jī)壓入塑料卡中，加入干燥劑，密封包裝保存。