[發(fā)明專利]基于微流控芯片檢測呼吸道合胞病毒A、B型的試劑盒及其使用方法有效
| 申請?zhí)枺?/td> | 201810457543.4 | 申請日： | 2018-05-14 |
| 公開（公告）號： | CN108411039B | 公開（公告）日： | 2021-06-11 |
| 發(fā)明（設(shè)計）人： | 許行尚;杰弗瑞·陳;王龍;于沛;張蓉蓉 | 申請（專利權(quán)）人： | 南京嵐煜生物科技有限公司 |
| 主分類號： | C12Q1/70 | 分類號： | C12Q1/70;C12Q1/686 |
| 代理公司： | 南京正聯(lián)知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 32243 | 代理人： | 王素琴 |
| 地址： | 211122 *** | 國省代碼： | 江蘇;32 |
| 權(quán)利要求書： | 查看更多 | 說明書： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 基于 微流控 芯片 檢測 呼吸道 病毒 試劑盒 及其 使用方法 | ||
1.一種基于微流控芯片的檢測呼吸道合胞病毒A、B型的試劑盒，其特征在于，該試劑盒包括有主動控制流路的多通量微流控核酸檢測芯片、預(yù)裝干粉檢測試劑和陽性質(zhì)控品；所述預(yù)裝干粉檢測試劑含有呼吸道合胞病毒A、B型的特異性保守序列的引物及TaqMan熒光探針；
其中，特異性保守序列的引物序列為：
呼吸道合胞病毒A型，SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2；
呼吸道合胞病毒B型，SEQ ID NO.4和SEQ ID NO.5；
特異性TaqMan探針序列為：
呼吸道合胞病毒A型，SEQ ID NO.3；
呼吸道合胞病毒B型，SEQ ID NO.6；
所述預(yù)裝干粉檢測試劑還包括有PCR緩沖液、海藻糖、牛血清白蛋白、dATP、dUTP、dCTP、dGTP，MgCl2、HotStart Taq酶、逆轉(zhuǎn)錄酶和UNG酶；
所述引物在擴增體系中的終濃度為100nM；所述探針在擴增體系中的終濃度為50nM；所述海藻糖在擴增體系中的終濃度為1％w/v；所述牛血清白蛋白在擴增體系中的終濃度為0.2％w/v；所述HotStart Taq酶、逆轉(zhuǎn)錄酶、UNG酶在擴增體系中的終濃度為1U～5U；所述dATP、dUTP、dCTP、dGTP在擴增體系中的終濃度均為0.5mM；所述MgCl2在擴增體系中的終濃度為5.5mM；
所述陽性質(zhì)控品中含有呼吸道合胞病毒A、B型的擴增基因序列的質(zhì)粒；
所述預(yù)裝干粉檢測試劑的制備方法為：
(1)將配制好的檢測試劑溶液以單人份分裝到PCR管中，放入-80℃條件下凍存8h以上；
(2)將凍好的檢測試劑放入到真空冷凍干燥機中，設(shè)定凍干機程序為：
-50℃，1h，1大氣壓；
-40℃，5h，＜10Pa；
-10℃，2h，＜10Pa；
0℃，2h，＜10Pa；
30℃，5h，＜10Pa；
(3)干燥完成后，取出試劑，即為干粉形態(tài)；
所述預(yù)裝干粉檢測試劑是預(yù)裝在所述主動控制流路的多通量微流控核酸檢測芯片中。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的基于微流控芯片的檢測呼吸道合胞病毒A、B型的試劑盒，其特征在于，所述主動控制流路的多通量微流控核酸檢測芯片具有微流控流道，包括一條出樣主流道以及若干條分樣流道；各分樣流道分體設(shè)置，每個分樣流道對應(yīng)一個反應(yīng)腔，能等分各個反應(yīng)腔的試劑。
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