[發明專利]用于歐鰉苗種鑒定的生物傳感檢測方法

有效

• 申請號: 201810456781.3
• 申請日: 2018-05-14
• 公開（公告）號: CN108913778B
• 公開（公告）日: 2021-07-13
• 發明（設計）人: 趙紫霞;江炎亮;許建;張研
• 申請（專利權）人: 中國水產科學研究院
• 主分類號: C12Q1/6888
• 分類號: C12Q1/6888;C12Q1/686;C12Q1/6825
• 代理公司: 北京遠大卓悅知識產權代理有限公司 11369
• 代理人: 史霞

本發明公開了一種用于歐鰉苗種鑒定的生物傳感檢測方法，以待測苗種的DNA為模板進行探針延伸獲得探針延伸產物，應用生物傳感檢測方法檢測所述探針延伸產物是否能夠通過錨定標記分子錨定至修飾有錨定受體的電極表面并產生電化學信號，若是，則待測苗種為歐鰉苗種，其中，包括以下步驟：在探針延伸中，將帶有錨定標記分子的dUTP連接至如SEQ ID NO:3所示的核苷酸序列的探針上以獲得所述待測苗種中歐鰉苗種的探針延伸產物。本發明方法能夠在鱘魚苗種引進時鑒定其物種來源，協助養殖機構開展養殖對象和加工產品分級。

技術領域

本發明涉及水產生物技術領域，特別涉及一種用于歐鰉苗種鑒定的生物傳感檢測方法。

背景技術

鱘魚是鱘形目(Acipenseriformes)魚類的統稱，全世界現存2科6屬27種，已全部列入《瀕危野生動植物種國際貿易公約》(CITES)保護物種名錄，當前合法銷售的鱘魚及其制品主要依賴人工養殖。在這一背景下，我國鱘魚養殖產業蓬勃發展，年產量從2003年的0.94萬噸增長至2016年的8.98萬噸，穩居世界第一鱘魚養殖大國，占世界總產量的80％以上。2017年起，鱘魚被列入國家現代農業產業技術體系(特色淡水魚體系)中。

鱘魚是水產養殖物種中典型的高附加值品類，其魚卵加工而成的魚子醬是國際公認的高端食材，具有深厚的歷史積淀和文化傳承。魚子醬飲食文化中對魚卵的種質來源有著嚴格的限定，不同物種的魚子醬價格差異巨大，使用歐鰉魚卵加工而成的Beluga魚子醬為其中的極品，價比黃金。但目前人工養殖的鱘魚品類繁多，不僅包括鱘形目的多個物種，還涉及多個人工育成的雜交品種，外形相似度較高，很多養殖機構和人員并不清楚養殖對象的遺傳背景。

目前進行鱘魚物種鑒定主要采用的方法包括形態學和分子生物學方法。形態學方法不適用于受精卵和小規格苗種，無法在苗種引進階段準確鑒定物種，而以物種特異性DNA序列為檢測靶標的方法則不受發育時期、樣本形態、組織來源的影響，并能夠形成易于標準化的檢測體系，在物種鑒定技術中逐漸占據了主流地位。

Congiu等使用AFLP分子標記方法進行了鱘魚及魚子醬產品的鑒別應用，Chelomina等使用RAPD分子標記進行施氏鱘(Acipenser schrenckii)自然種群中雜交種鑒別分析，董傳舉等開發了基于線粒體DNA的PCR-RFLP分子鑒定方法，但現有方法均需要通過電泳操作來檢測產物，操作不當時對檢測人員存在健康風險，未經安全處理的實驗廢棄物也可能造成環境污染隱患，因此只適用于專業實驗室，不適用于現場檢測。

因此，亟待開發準確便捷的現場檢測技術，用于苗種引進時鑒定其物種來源，協助養殖機構開展養殖對象和加工產品分級。

發明內容

本發明的一個目的是解決至少上述問題，并提供至少后面將說明的優點。

本發明還有一個目的是提供一種用于歐鰉苗種鑒定的生物傳感檢測方法，其能夠通過對鱘魚的待測苗種進行檢測，以在歐鰉引進時鑒定其物種來源，協助養殖機構開展養殖對象和加工產品分級。

為了實現根據本發明的這些目的和其它優點，提供了一種用于歐鰉苗種鑒定的生物傳感檢測方法，以待測苗種的DNA為模板進行探針延伸獲得探針延伸產物，應用生物傳感檢測方法檢測所述探針延伸產物是否能夠通過錨定標記分子錨定至修飾有錨定受體的電極表面并產生電化學信號，若是，則待測苗種為歐鰉苗種，其中，包括以下步驟：

在探針延伸中，將帶有錨定標記分子的dUTP連接至如SEQ ID NO:3所示的核苷酸序列的探針上以獲得所述待測苗種中歐鰉苗種的探針延伸產物。

優選的是，還包括以下步驟：在探針延伸之前，向提取的待測苗種的DNA中依次加入帶有錨定標記分子的dUTP、dATP、dTTP、DNA聚合酶、緩沖液和如SEQ ID NO:3所示的核苷酸序列作為歐鰉特異性單鏈DNA探針構建探針延伸反應體系。