[發明專利]一種分離制備茶樹紫芽花色苷高純品的方法

在審

• 申請號: 201810455700.8
• 申請日: 2018-05-14
• 公開（公告）號: CN108484701A
• 公開（公告）日: 2018-09-04
• 發明（設計）人: 龔志華;劉林峰;肖文軍
• 申請（專利權）人: 湖南農業大學
• 主分類號: C07H17/065
• 分類號: C07H17/065;C07H1/08
• 代理公司: 長沙正奇專利事務所有限責任公司 43113
• 代理人: 何為;袁穎華

一種分離制備茶樹紫芽花色苷高純品的方法，是將茶樹紫芽經酸性乙醇溶液提取后，先萃取脫脂和強酸型陽離子交換樹脂分離去雜，再通過高速逆流色譜分離得到花色苷精制品，最后用制備型高效液相色譜純化得到5種花色苷高純品。本方法以富含花色苷的紫芽茶樹品種(紫娟、紅芽佛手、安73和自選9803)的茶鮮葉作為原料，創新應用多級分離、純化工藝技術，同時制得單一花色苷純度達到90％以上的5種茶樹紫芽花色苷高純品，其中飛燕草素?3?O?(6?(E)對香豆酸)吡喃半乳糖苷純度超過98％，達到單體質量要求。整個生產工藝簡單，生產成本較低，可操作性強，不僅為其藥理藥效的研究和功能性終端產品的開發提供優質原料，而且真正實現了茶樹紫芽資源的高值化利用。

技術領域

本發明涉及一種分離制備茶樹紫芽花色苷高純品的方法，尤指將茶樹紫芽經酸性乙醇提取后，先通過有機溶劑萃取脫脂和陽離子交換樹脂的前處理工藝去雜后，再通過高速逆流色譜分離和制備型高效液相色譜純化來制備紫芽茶樹花色苷高純品的方法。

背景技術

花色苷是一類具有2-苯基苯并吡喃基本母核結構的植物次生代謝產物，具有抗氧化、清除自由基等多種生物活性，是近年天然產物開發利用領域的熱點之一。茶葉花色苷具有抗氧化、清除自由基、解毒護肝、抗菌、降血壓、降血脂、消炎、抗癌、防治心血管疾病等多種生物活性。茶樹芽葉出現紫化主要是由茶樹種質、發育特性及其生長環境條件等因素所引起的花色苷含量顯著增加的抗逆生理表現。隨著人們對紫芽茶樹花色苷研究的深入以及健康養生意識的增強，茶葉紫芽花色苷的高值化利用越來越受到業界的關注，開發利用茶樹紫芽花色苷苷具有重要理論和實踐意義。

目前，茶葉花色苷的提取工藝主要是由其他富含花色苷的植物如黑莓、越橘、紅樹莓、紫馬鈴薯等的提取工藝發展而來，其中酸性極性溶劑提取茶葉花色苷工藝被廣泛運用。分離純化植物花色苷的方法很多，一般采用層析柱進行純化，如大孔吸附樹脂等，但存在操作復雜、耗時長、分離得率低及純度不高等問題。新興的技術如高效逆流色譜在植物花色苷純化中有成功應用，如陸英等、劉雪輝等通過高速逆流色譜法分別分離紫甘薯花和玫瑰茄花萼中的花色苷單體組分。然而，由于茶葉中花色苷相比黑莓、越橘、紅樹莓、紫馬鈴薯等植物資源，含量較低，種類較多，從而使得在茶葉花色苷高純品或單體的分離制備上，未能取得突破性進展。

為此，本發明以花色苷含量相對較高的紫芽茶樹品種(紫娟、紅芽佛手、安73和自選9803)的茶鮮葉作為原料，創新應用酸性乙醇提取、有機溶劑萃取脫脂、陽離子交換樹脂去雜、高速逆流色譜分離、制備型高效液相色譜純化等多級分離、純化工藝技術，以期創建一種同時分離制備多種茶樹紫芽花色苷高純品的方法，為茶樹紫芽花色苷高純品或單體的工業化生產以及茶樹紫芽資源的高值化利用提供可靠技術方法支持。

發明內容

本發明所要解決的技術問題是，提供一種在技術經濟上適于工業化推廣應用、在產品質量上要求單一花色苷純度達到90％以上的分離制備茶樹紫芽花色苷高純品的方法。

為了解決上述技術問題，本發明所采用的技術方案是：一種分離制備茶樹紫芽花色苷高純品的方法，該方法步驟如下：

a、茶樣前處理工藝：以紫芽茶樹一芽二葉為原料，將茶葉真空冷凍干燥，磨成粉，用含冰醋酸的乙醇溶液在室溫下靜置避光浸提，得提取液；按體積比配制正己烷:乙酸乙酯:水＝1～1.5:1～1.5:1.5～2的混合溶劑，以該混合溶劑對該提取液進行萃取脫脂；將脫脂后的提取液上鈉型732陽離子交換樹脂柱，先采用70-90％體積濃度的乙醇洗脫以去除多酚類雜質，再采用4％HCl-乙醇溶液進行梯度洗脫，按乙醇濃度梯度分別收集洗脫液，合并洗脫液，濃縮回收乙醇，過D101大孔吸附樹脂脫除鹽酸，減壓濃縮，真空冷凍干燥，得花色苷粗品粉末；此時，花色苷粗品中總花色苷的純度達到20.4％以上，得率達到91.8％以上；