[發明專利]一種分離制備茶樹紫芽花色苷高純品的方法

在審

• 申請號: 201810455700.8
• 申請日: 2018-05-14
• 公開（公告）號: CN108484701A
• 公開（公告）日: 2018-09-04
• 發明（設計）人: 龔志華;劉林峰;肖文軍
• 申請（專利權）人: 湖南農業大學
• 主分類號: C07H17/065
• 分類號: C07H17/065;C07H1/08
• 代理公司: 長沙正奇專利事務所有限責任公司 43113
• 代理人: 何為;袁穎華

1.一種分離制備茶樹紫芽花色苷高純品的方法，其特征在于：該方法步驟如下：

a、茶樣前處理工藝：以紫芽茶樹一芽二葉為原料，將茶葉真空冷凍干燥，磨成粉，以含冰醋酸的乙醇溶液在室溫下靜置避光浸提，得提取液；以正己烷、乙酸乙酯及水按體積比為1～1.5:1～1.5:1.5～2混合的混合溶劑對提取液進行萃取脫脂；將脫脂后的提取液上鈉型732陽離子交換樹脂柱，先采用70-90％體積濃度的乙醇洗脫以去除多酚類雜質，再采用4％HCl-乙醇溶液進行梯度洗脫，按乙醇濃度梯度分別收集洗脫液，合并洗脫液，濃縮回收乙醇，過D101大孔吸附樹脂脫除鹽酸，減壓濃縮，真空冷凍干燥，得花色苷粗品粉末；

b、高速逆流色譜分離制備花色苷精制品：將上述花色苷粗品粉末用純水稀釋至10％質量濃度，注入高速逆流色譜儀中進行分離，在溫度20～30℃、檢測波長280nm的條件下，將乙酸乙酯-正丁醇-乙腈-0.1％三氟乙酸水按體積比為0.5～1.5:3～4:1～2:5～7混合作為兩相溶劑系統，分步接收色譜流出液進行檢測,合并相同的化合物流出夜,減壓濃縮，真空冷凍干燥，得到花色苷精制品；

c、制備型高效液相色譜純化花色苷高純品：將上述花色苷精制品用純水稀釋至10％質量濃度，注入制備型高效液相色譜儀中進行純化，根據流出液顏色、出峰峰形及出峰時間分別收集到5種花色苷組分流出液，將該些花色苷組分流出液分別進行高效液相色譜檢測，當花色苷組分純度≥90％時，真空冷凍干燥，即得花色苷高純品；當流出液中的花色苷組分純度低于90％時，再次以制備型高效液相色譜儀進行純化，將組分流出液分別真空冷凍干燥，即得到純度≥90％的花色苷高純品。

2.如權利要求1所述的一種分離制備茶樹紫芽花色苷高純品的方法，其特征在于：所述紫芽茶樹品種為富含花色苷的紫娟、自選9803、紅芽佛手或安73。

3.如權利要求1所述的一種分離制備茶樹紫芽花色苷高純品的方法，其特征在于：所述步驟a中浸提的條件為：乙醇溶液的體積濃度為70～90％，料液比為1g:20～25ml，每次浸提時間為12～24h，浸提次數為2～3次，冰醋酸的體積分數為1～10％。

4.如權利要求1所述的一種分離制備茶樹紫芽花色苷高純品的方法，其特征在于：所述步驟a中梯度洗脫的乙醇體積濃度分別為50％、60％、70％、80％、90％。

5.如權利要求1所述的一種分離制備茶樹紫芽花色苷高純品的方法，其特征在于：所述方法中提及的減壓濃縮條件均為：真空度為-0.05～-0.09MPa，溫度為40～45℃。

6.如權利要求1所述的一種分離制備茶樹紫芽花色苷高純品的方法，其特征在于：所述方法中提及的真空冷凍干燥條件均為：真空度為-0.05～-0.09MPa，溫度為-38～-42℃。

7.如權利要求1所述的一種分離制備茶樹紫芽花色苷高純品的方法，其特征在于：所述步驟c中制備型高效液相色譜分離純化條件為：C₁₈柱制備柱，波長280nm，流動相1％醋酸-乙腈，梯度洗脫0～55min、10％～40％乙腈，流速5～20mL/min，進樣量為0.5～2mL。