[發(fā)明專利]一種提高紫花苜蓿游離小孢子出胚率的方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201810450810.5
• 申請日: 2018-05-11
• 公開（公告）號: CN108633736B
• 公開（公告）日: 2022-01-21
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 儀登霞;王贊;蘇彥賓
• 申請（專利權(quán)）人: 中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院北京畜牧獸醫(yī)研究所
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 北京華仲龍騰專利代理事務(wù)所(普通合伙) 11548
• 代理人: 黃玉玨

1.一種提高紫花苜蓿游離小孢子出胚率的方法，其特征在于，該方法包括在紫花苜蓿盛花期，從供體植株上挑選健壯無病蟲害花蕾，選取游離小孢子處于單核居中期的花蕾進行培養(yǎng)；

在對所述花蕾進行培養(yǎng)前，對所述花蕾先用75％酒精消毒30s，之后用8％次氯酸鈉消毒12min，無菌水沖洗5次后放于無菌研缽中；

培養(yǎng)方法包括在無菌研缽中加入半量MS液體培養(yǎng)基與B5液體培養(yǎng)基，半量MS液體培養(yǎng)基與B5液體培養(yǎng)基的體積比為1:1，用研棒輕輕擠壓使小孢子游離于混合培養(yǎng)基溶液中，用400目孔徑尼龍網(wǎng)紗過濾收集濾液，離心3次，每次3min，然后將濾液懸浮于半量MS液體培養(yǎng)基與半量NLN液體培養(yǎng)基所組成的混合培養(yǎng)基中，半量MS液體培養(yǎng)基與半量NLN液體培養(yǎng)基的體積比為1: 1，調(diào)整小孢子在半量MS液體培養(yǎng)與半量NLN液體培養(yǎng)基所組成的混合培養(yǎng)基中密度至1×10⁴個/mL；

其中，培養(yǎng)方法包括向半量MS液體培養(yǎng)與半量NLN液體培養(yǎng)基所組成的混合培養(yǎng)基中添加100μL質(zhì)量濃度為 2％的活性炭，封口，4℃低溫暗培養(yǎng)24h后，轉(zhuǎn)到35℃高溫暗培養(yǎng)72h，再轉(zhuǎn)到25℃暗培養(yǎng)直至出胚；在游離小孢子出胚3周后，將胚轉(zhuǎn)至B5固體培養(yǎng)基中，在25℃、光照16h/d條件下培養(yǎng)成再生植株。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的提高紫花苜蓿游離小孢子出胚率的方法，其特征在于，小孢子在半量MS液體培養(yǎng)與半量NLN液體培養(yǎng)基所組成的混合培養(yǎng)基中培養(yǎng)時，將接種有小孢子的半量MS 液體培養(yǎng)與半量NLN液體培養(yǎng)基所組成的混合培養(yǎng)基分裝于無菌、直徑為60mm的培養(yǎng)皿中，每皿 2mL。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的提高紫花苜蓿游離小孢子出胚率的方法，其特征在于，在紫花苜蓿盛花期，從供體植株上摘取健壯無病蟲害花蕾的時間為于晴天上午8:00-10:00從供體植株上摘取。