[發明專利]納米金籠復合物及其在制備檢測人尿液或血液中的cMyBP-C的試劑盒中的應用

有效

• 申請號: 201810449820.7
• 申請日: 2018-05-11
• 公開（公告）號: CN108918857B
• 公開（公告）日: 2020-08-07
• 發明（設計）人: 張寄南;張雷
• 申請（專利權）人: 南京博天科智生物技術有限公司
• 主分類號: G01N33/532
• 分類號: G01N33/532;G01N33/558;G01N33/68;G01N33/577;G01N33/58;B82Y30/00;B82Y15/00
• 代理公司: 南京蘇高專利商標事務所(普通合伙) 32204
• 代理人: 王艷

本發明公開一種納米金籠復合物及其制備方法和在制備檢測人尿液或血液中的cMyBP?C試劑盒中的應用。納米金籠復合物與一對抗人心肌球蛋白C單抗BT09和BT10共價結合，形成快速檢測人尿液或血液中的cMyBP?C的試劑盒。本發明使用納米金籠復合物代替目前膠體金試紙條常用的球形納米顆粒。應用于人血和/或尿cMyBP?C檢測敏感性和特異性極高，在基于白色背景下能比球形金納米顆粒產生更好的分辨光信號。應用特定條件下（形狀、尺寸）正方體中空納米晶體與DNA和蛋白質共價鍵結合機制，生物素標記的單鏈DNA連接二種尺寸的納米抗體，較膠體金納米球POCT產品增強檢測信號達5000~10000倍。結果易觀察，靈敏度達到100fg/mL，15分鐘內就能判讀結果，具有良好的穩定性和重復性。

技術領域

本發明屬于生物技術應用領域，具體涉及一種納米金籠復合物及其制備方法和應用，尤其涉及該納米金籠復合物在制備血和/或尿液心臟肌球蛋白結合蛋白C檢測試紙條方面的應用。

背景技術

急性心肌梗死(acute myocardial infarction,AMI)和/或損傷(myocardialinjury,MCI)是一類高發病率的臨床重大疾病。歐美、中國乃至全球人群中AMI、MCI的死亡率、住院和就診花費均居前列。心肌壞死生物標志物心肌肌鈣蛋白(cTn)T/I是目前診斷AMI、危險度分層的首選標志物(Nat Rev Cardiol.2012 Nov；9(11):620-633)。但值得注意的是，血液cTn濃度是在心肌損傷后6-8小時才開始增高，16-18小時左右達峰值，因此胸痛發作時間＜6h的AMI患者，其cTn升高并不明顯，缺乏診斷敏感性。近年新一代高敏感方法檢測cTn(hs-cTn)相繼問世，引起關注，可在胸痛＜3h檢測增高，但因新一代高敏感方法可在大約99％的表面健康人群中也可觀察到，增高了假陽性結果(Swiss Med Wkly.2011 May10；141:w13202.Intern Emerg Med.2017Mar；12(2):147-155.中華內科雜志2015,54(10):899-904)。其他如長跑、腎臟疾病等非心臟因素也可以引起cTn增高。目前其他心肌損傷生物標志物如肌紅蛋白、CK-MB等缺乏敏感性或者特異性。在此背景下，尋找特異性更高、出現時間更早的AMI標志物具有十分重要的臨床意義。

心臟肌球蛋白結合蛋白C(cMyBP-C)是心臟組織含量最豐的蛋白質之一(位列心臟2300個蛋白質的第19位)，其總量分別是心臟cTnI及cTnT 2倍多(cTnI及cTnT分別位列第118位及92位，Mol Cell Proteomics.2009 Dec；8(12):2687-99)。cMyBP-C的分子量約140KD，位于心肌粗肌絲肌球蛋白頭部的橫橋處，是調節心肌收縮的關鍵蛋白質。cMyBP-C蛋白質N端與其他橫紋肌肌球蛋白結合蛋白C不同，是心臟組織特異表達。急性心肌損傷、AMI狀態下，心肌受損，其N端約40KD片斷釋放入血，從而使得血液cMyBP-C濃度升高，cMyBP-C成為自cTn以來最有前途的心肌損傷生物標志物。

發明內容

發明目的：為達到從AMI和/或急性心肌損傷病人血液和/尿液中快速檢測cMyBP-C的目的，近年即時檢驗(point-of-care testing,POCT)快速檢測心臟標志物發展迅速，包括膠體金技術，采用免疫層析雙抗體夾心法原理，利用膠體金可以牢固吸附在抗體的表面而不影響抗體的活性，當標記抗體與抗原反應聚集到一定濃度時，可以直接呈現顏色，可直接定性進行標志物濃度判斷，結合專用閱讀儀可達到半定量結果。整個檢測過程可控制在15分鐘內。目前尚無cMyBP-C快速檢測試劑盒的專利或產品。

技術方案：為解決上述技術問題，本發明采用的技術方案為：一種納米金籠復合物，所述納米金籠復合物是通過中空正方體金納米粒子與特定單鏈DNA以及顯色抗體鼠抗人cMyBP-C抗體BT09相連接而成的復合物。

其中，上述特定單鏈DNA的核苷酸序列如SEQ ID NO:1或SEQ ID NO:2或SEQ IDNO:3或SEQ ID NO:4。