[發明專利]一種有利于桑黃中黃酮類物質富集的液體發酵培養方法

在審

• 申請號: 201810449464.9
• 申請日: 2018-05-11
• 公開（公告）號: CN108611381A
• 公開（公告）日: 2018-10-02
• 發明（設計）人: 王晶;師粒晶;張勇;李福森;劉春明
• 申請（專利權）人: 長春師范大學
• 主分類號: C12P17/06
• 分類號: C12P17/06;C12R1/645
• 代理公司: 北京華仲龍騰專利代理事務所(普通合伙) 11548
• 代理人: 李靜

本發明公開了一種有利于桑黃中黃酮類物質富集的液體發酵培養方法，包括母種制備和桑黃液體培養，以PDA培養基為基礎，在其中加入一定量的蛋白胨，采用液體發酵培養方式，對桑黃菌株進行培養，以期提高桑黃菌絲體中黃酮類化合物含量。本發明的方法中培養基配置簡單方便，節約成本，效率較高，黃酮類化合物的產量較高，是一種可以滿足市場要求的人工培養方法。

技術領域

本發明涉及桑黃領域，具體是一種有利于桑黃中黃酮類物質富集的液體發酵培養方法。

背景技術

桑黃為珍貴稀有的藥用真菌，生長被子植物的樹干上，如桑樹、楊樹、松樹等，有“森林黃金”之稱，認為是已知高等真菌中抗癌效果最好的珍稀藥用菌類之一，已成為藥用真菌研究領域的一個熱點。桑黃中含有多種化學成分，其中，多糖、黃酮和酚類等物質為其主要有效成分。現代藥理作用研究表明，桑黃具有抗氧化、抗腫瘤、增強免疫力、抑菌、消炎、保肝護肝及抑制尿酸等多種藥理活性。桑黃也是國際公認的使用免疫療法治療癌癥的領域中有效率排在前茅的一種真菌。桑黃及其提取物是通過激活人體免疫系統從而產生治療功效，因此對人體無毒無害，即使長期大劑量服用也無任何毒副作用。對于其他各種因免疫系統異常而引起的疾病如糖尿病，肝功能異常等也有其特別的效果。然而，高等真菌中的次生代謝產物面臨著資源匱乏、生物分離、鑒定、生物合成的新陳代謝和篩選模型等諸多挑戰，使其大規模生產受到了限制。但是由于受生理狀態的特殊性和復雜性以及外部環境的制約，自然界中桑黃子實體稀少，雖能人工栽培出桑黃子實體，但所需條件苛刻，生物學效率低，目前難以實現規模化栽培，自然界中桑黃子實體稀少，野生真菌價格十分昂貴，目前難以實現規模化栽培。針對該問題，目前較多采用液體深層發酵技術，該技術具有無菌、生產條件可控、短時間內可獲得大量細胞產物和代謝物、可自動化控制及規模化生產等優點，然而，不少學者對藥用真菌發酵進行研究但得到次級代謝產物含量比較低，因此，為了加強藥用真菌次生代謝產物的產量，有必要對培養基成分、各種發酵工藝參數進行研究，以期其產量能夠達到理想水平。

目前對于桑黃有效成分研究主要集中于多糖類化合物，而桑黃是少有的可以產生黃酮類化合物的藥用真菌，研究報道黃酮類化合物具有廣泛的藥理作用。此外，對于桑黃發酵培養研究中，主要評價其菌絲體及多糖類化合物的產量，對其中黃酮類化合物的考察相對較少。因此，在藥用真菌桑黃的液體培養條件方面，以其菌絲體中次生代謝產物中黃酮類化合物的含量為目標，開發具有有利于黃酮類化合物富集的液體培養方法具有現實意義。

現有的桑黃液體發酵培養基優化技術如下：第一，綜合碳氮源的篩選: 以基礎培養基為對照，分別以2%豆粉、1%豆粉+1%玉米粉、2%麩皮、2%花生粉為綜合碳氮源，替代基礎培養基中的玉米粉，其他成分不變，接種 10%的液體菌種，28℃、180r/min振蕩培養 3.5 d，測定菌絲體產率；第二，最適碳源、源的篩選: 以基礎培養基為對照，分別添加2%的蔗糖、2%乳糖、2%可溶性淀粉替代葡萄糖，其他成分不變，接種10%的液體菌種， 28℃、180 r/min振蕩培養 3.5 d，測定菌絲體產率，在碳源試驗基礎上，分別以1% 的酵母膏、牛肉膏、硫酸銨及1%混合氮源(蛋白胨酵母膏= 1) 代替基礎培養基中的蛋白胨，同法進行最適氮源的篩選試驗；第三，正交試驗因素及水平: 根據單因素試驗結果，選取最適的碳源、氮源、綜合碳氮源，采取 L9 (34) 正交試驗的方法對發酵培養基配方進行優化；第四，桑黃液體發酵培養條件優化：采用常規實驗方法對發酵培養基初始 p H值、培養溫度、接種量、裝液量及搖床轉速進行優化實驗，發酵實驗的基礎培養條件: 接種 10% 的液體菌種，于28℃、180 r /min 振蕩培養3.5 d，測定菌絲體產率；第五，桑黃液體發酵周期測定 ：在優化培養基及培養條件下，對桑黃菌株進行液體發酵培養，24、36、48、60、70、75、78、82、100、108 h 時對菌絲體產率、黃酮含量進行動態測定，確定最佳的液體發酵周期。這種方法的培養基配置不易，培養成本高，黃酮類化合物的產量卻不高。

發明內容

本發明的目的在于提供一種有利于桑黃中黃酮類物質富集的液體發酵培養方法，以解決上述背景技術中提出的問題。