[發明專利]一種促進皮膚創傷愈合的多因子載體的制備及應用

在審

• 申請號: 201810448588.5
• 申請日: 2018-05-11
• 公開（公告）號: CN108611321A
• 公開（公告）日: 2018-10-02
• 發明（設計）人: 沈潔;沈艷
• 申請（專利權）人: 深圳市曠逸生物科技有限公司
• 主分類號: C12N5/078
• 分類號: C12N5/078;A61K35/28;A61P17/02
• 代理公司: 北京華際知識產權代理有限公司 11676
• 代理人: 楊覓

本發明公開了皮膚創傷修復技術領域的一種促進皮膚創傷愈合的多因子載體的制備及應用，該制備方法的具體步驟如下：S1：取25～30歲的成年人腹部皮下脂肪組織作為人脂肪干細胞標本；S2：將分離好的脂肪組織標本移入安培瓶，用剪刀剪碎10～15min后呈乳糜狀；S3：在無菌條件下從豬髂骨處抽取骨髓；S4：將步驟S2中的標本與步驟S3中的充質干細胞混合；S5：隨后將塔斯品堿混入步驟S4中的混合物中；S6：過濾后的液體加入適量的干細胞培養液，于30～40°下培養3～7d，制得成品，本發明可以優化成纖維細胞的生物學性能，促進了成纖維細胞的遷移以及增殖能力，調控膠原合成，有助于縮短皮膚創傷愈合的時間，并減少瘢痕的形成，提高創傷愈合質量。

技術領域

本發明公開了一種促進皮膚創傷愈合的多因子載體的制備及應用，具體為皮膚創傷修復技術領域。

背景技術

皮膚軟組織損傷是日常生活中常見的一種創傷，目前常用的皮膚軟組織損傷治療主要是通過全身支持治療、創面的清理以及新型敷料和皮膚移植等方法，傳統的治療方法雖然具有一定的效果但其愈合時間的快慢難以把握，斑痕的大小、皮源緊張和易感染的問題有待解決。

近年來，以干細胞特別是以間充質干細胞為基礎的皮膚再生醫學研究得到廣泛的關注，研究表明，間充質干細胞對組織的損傷具有良好的修復作用，盡管其機制尚未完全闡明，但初步結果顯示，可能與損傷的刺激及局部創面微環境中各種細胞因子有關，它們通過促進間充質干細胞趨化以及誘導間充質干細胞向所需要的組織或細胞分化來參與皮膚創面的修復，因此，在組織的修復中具有臨床應用前景。然而，間充質干細胞植入體內后存在長期應用安全性問題以及存儲和運輸困難等問題，極大的限制其臨床應用。

微囊泡結構exosome是近年來發現的細胞間信號通訊的重要途徑，通過細胞外多胞體分泌到胞外，是細胞可溶性細胞因子外的重要旁分泌形式。作為非細胞治療的重要組成部分，exosome在促進皮膚損傷修復中具有重要的意義?，F有的exosome制備工藝制出的為囊泡結構存在著長期保存過程中不穩定，且其攜帶的含有的生物活性的有效成分容易受到破壞。為此，我們提出了一種促進皮膚創傷愈合的多因子載體的制備及應用投入使用，以解決上述問題。

發明內容

本發明的目的在于提供一促進皮膚創傷愈合的多因子載體的制備及應用，以解決上述背景技術中提出的問題。

為實現上述目的，本發明提供如下技術方案：一種促進皮膚創傷愈合的多因子載體的制備，該制備方法的具體步驟如下：

S1：取25～30歲的成年人腹部皮下脂肪組織作為人脂肪干細胞標本，用配置好的標本液反復沖洗標本3～5次；

S2：用鑷子分離脂肪標本表面的筋膜和血管，將分離好的脂肪組織標本移入安培瓶，用剪刀剪碎10～15min后呈乳糜狀，放置備用；

S3：在無菌條件下從豬髂骨處抽取骨髓，經過密度梯度離心收集界面層的單個核細胞，隨后用標本液沖洗2～3次，離心收集細胞，重懸于培養液中進行培養，隔日換液，棄去未貼壁的細胞，待貼壁細胞繼續培養到80～90％融合時，用胰蛋白酶消化，傳代培養；

S4：將步驟S2中的標本與步驟S3中的充質干細胞混合，隨后用0.1～0.3％Ι型膠原酶在30～40°水浴下消化40～50min，期間不斷搖勻加速消化；

S5：隨后將塔斯品堿混入步驟S4中的混合物中，在離心管中離心，吸干凈溶液上層脂肪細胞層和筋膜層，下層液體吹打混勻后過細胞篩；

S6：過濾后的液體加入適量的干細胞培養液，吹打混勻后，接種至培養瓶中，于30～40°下培養3～7d，制得成品。

優選的，所述步驟S1中，標本液為三氨基甲烷、蛋白質、羥脯氨酸以及純水的混合物，其中三氨基甲烷：蛋白質：羥脯氨酸：純水＝0.5:1.5:0.2:3。

優選的，所述步驟S2中，將安培瓶放置在振蕩機上，振蕩3～5min后停止。