[發(fā)明專利]一種促進(jìn)皮膚創(chuàng)傷愈合的多因子載體的制備及應(yīng)用

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• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201810448588.5
• 申請(qǐng)日: 2018-05-11
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN108611321A
• 公開(kāi)（公告）日: 2018-10-02
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 沈潔;沈艷
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 深圳市曠逸生物科技有限公司
• 主分類號(hào): C12N5/078
• 分類號(hào): C12N5/078;A61K35/28;A61P17/02
• 代理公司: 北京華際知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11676
• 代理人: 楊覓

1.一種促進(jìn)皮膚創(chuàng)傷愈合的多因子載體的制備，其特征在于：該制備方法的具體步驟如下：

S1：取25～30歲的成年人腹部皮下脂肪組織作為人脂肪干細(xì)胞標(biāo)本，用配置好的標(biāo)本液反復(fù)沖洗標(biāo)本3～5次；

S2：用鑷子分離脂肪標(biāo)本表面的筋膜和血管，將分離好的脂肪組織標(biāo)本移入安培瓶，用剪刀剪碎10～15min后呈乳糜狀，放置備用；

S3：在無(wú)菌條件下從豬髂骨處抽取骨髓，經(jīng)過(guò)密度梯度離心收集界面層的單個(gè)核細(xì)胞，隨后用標(biāo)本液沖洗2～3次，離心收集細(xì)胞，重懸于培養(yǎng)液中進(jìn)行培養(yǎng)，隔日換液，棄去未貼壁的細(xì)胞，待貼壁細(xì)胞繼續(xù)培養(yǎng)到80～90％融合時(shí)，用胰蛋白酶消化，傳代培養(yǎng)；

S4：將步驟S2中的標(biāo)本與步驟S3中的充質(zhì)干細(xì)胞混合，隨后用0.1～0.3％Ι型膠原酶在30～40°水浴下消化40～50min，期間不斷搖勻加速消化；

S5：隨后將塔斯品堿混入步驟S4中的混合物中，在離心管中離心，吸干凈溶液上層脂肪細(xì)胞層和筋膜層，下層液體吹打混勻后過(guò)細(xì)胞篩；

S6：過(guò)濾后的液體加入適量的干細(xì)胞培養(yǎng)液，吹打混勻后，接種至培養(yǎng)瓶中，于30～40°下培養(yǎng)3～7d，制得成品。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種促進(jìn)皮膚創(chuàng)傷愈合的多因子載體的制備，其特征在于：所述步驟S1中，標(biāo)本液為三氨基甲烷、蛋白質(zhì)、羥脯氨酸以及純水的混合物，其中三氨基甲烷：蛋白質(zhì)：羥脯氨酸：純水＝0.5:1.5:0.2:3。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種促進(jìn)皮膚創(chuàng)傷愈合的多因子載體的制備，其特征在于：所述步驟S2中，將安培瓶放置在振蕩機(jī)上，振蕩3～5min后停止。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種促進(jìn)皮膚創(chuàng)傷愈合的多因子載體的制備，其特征在于：所述步驟S3中，密度梯度離心采用氯化銫溶液作為梯度材料，其密度為1.91g/cm³。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種促進(jìn)皮膚創(chuàng)傷愈合的多因子載體的制備，其特征在于：所述步驟S3中，培養(yǎng)液為氨基酸和葡萄糖的混合物，其中氨基酸：葡萄糖＝1:1.3。

6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種促進(jìn)皮膚創(chuàng)傷愈合的多因子載體的制備，其特征在于：所述步驟S5中，離心的速度為1000～1500rpm，離心時(shí)間為5～10min。

7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種促進(jìn)皮膚創(chuàng)傷愈合的多因子載體的制備，其特征在于：所述步驟S5中，細(xì)胞篩的目數(shù)為100目。

8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種促進(jìn)皮膚創(chuàng)傷愈合的多因子載體的制備，其特征在于：所述步驟S6中，干細(xì)胞培養(yǎng)液由干細(xì)胞無(wú)血清培養(yǎng)基和干細(xì)胞無(wú)血清營(yíng)養(yǎng)添加物按照1:1.6的比例混合而成。

9.一種促進(jìn)皮膚創(chuàng)傷愈合的多因子載體的應(yīng)用，其特征在于：該多因子載體制備成針劑或溶劑，并應(yīng)用到促進(jìn)皮膚創(chuàng)傷愈合的臨床中。