[發(fā)明專利]表達豬流行性腹瀉病毒S基因的豬源BVDV重組病毒及應(yīng)用

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• 申請?zhí)枺?/td>: 201810447166.6
• 申請日: 2018-05-11
• 公開（公告）號: CN108611329A
• 公開（公告）日: 2018-10-02
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 劉惠莉;陶潔;李本強;程靖華;石迎;饒柏鐘
• 申請（專利權(quán)）人: 上海市農(nóng)業(yè)科學(xué)院
• 主分類號: C12N7/01
• 分類號: C12N7/01;C12N15/85;C12R1/93
• 代理公司: 上海開祺知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 31114
• 代理人: 張曉敏;費開逵

表達豬流行性腹瀉病毒S基因的豬源BVDV重組病毒及應(yīng)用，其在豬源BVDV的C核衣殼蛋白基因N端插入了豬流行性腹瀉病毒S基因的中和抗原表位序列。本發(fā)明獲得一種重組感染性克隆質(zhì)粒，該質(zhì)粒線性化后，體外轉(zhuǎn)錄成RNA，并轉(zhuǎn)染MDBK細(xì)胞，能成功拯救出表達豬流行性腹瀉病毒S蛋白的豬源BVDV重組病毒，該豬源BVDV重組病毒可表達PEDV S外源蛋白，同時用于PEDV和BVDV的防控。本發(fā)明的豬源BVDV重組感染性克隆為其他外源基因提供了合適的插入位點，可用作重組病毒載體，為后續(xù)體外修飾RNA、外源基因的插入、重組病毒的制備等研究提供有效的技術(shù)平臺。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于獸用生物制品技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種表達豬流行性腹瀉病毒S基因的豬源BVDV重組病毒及其應(yīng)用。

背景技術(shù)

牛病毒性腹瀉病毒(Bovine viral diarrhea virus，BVDV)和豬瘟病毒(Classical swine fever virus,CSFV)同屬于黃病毒科(Flaviviridae)瘟病毒屬(Pestivirus)，在血清學(xué)上具有一定的交叉反應(yīng)。

BVDV除了感染牛，還可感染豬，它引發(fā)的臨床癥狀影響或隱性感染可以影響到養(yǎng)豬業(yè)生產(chǎn)的各個環(huán)節(jié)，如生長遲緩、繁殖障礙、繼發(fā)感染和持續(xù)感染等等。該病幾乎在國內(nèi)各個省市均有流行，鄧宇等利用套式RT-PCR在2007～2010年對國內(nèi)部分地區(qū)的臨床樣品進行篩查，檢出BVDV的陽性率分別為23.1％(2007年)、27.7％(2008年)、33.6％(2009年)和23.6％(2010年)。豬感染BVDV不表現(xiàn)出臨床癥狀，或出現(xiàn)類似于豬瘟的癥狀，因而不僅給豬瘟的預(yù)防和控制帶來了很大的困難，也使BVDV的防控難上加難。

豬流行性腹瀉是由豬流行性腹瀉病毒(Porcine epidemic diarrhea virus，PEDV)引起的以嘔吐、腹瀉、脫水和對哺乳仔豬致死率高為特征的一種高度接觸性豬腸道傳染病。S蛋白是PEDV編碼蛋白中的一種結(jié)構(gòu)蛋白，它能把病毒粒子吸附在宿主細(xì)胞受體上，通過膜融合滲進細(xì)胞中，刺激宿主誘導(dǎo)產(chǎn)生中和抗體，具有PEDV抗原的作用。PEDV的核心表位抗原存在于S蛋白的編碼基因中，被認(rèn)為是PEDV亞單位疫苗的重要靶標(biāo)抗原。

2011年，豬流行性腹瀉在我國大規(guī)模流行，給養(yǎng)豬業(yè)造成嚴(yán)重的經(jīng)濟損失，PEDV毒株的變異，特別是S基因的變異，現(xiàn)有疫苗不能提供足夠的免疫保護是引起此次流行的主要原因。

反向遺傳學(xué)操作技術(shù)已成為新型疫苗研制的重要手段。目前，將PEDV和BVDV進行結(jié)合的研究，尚未見有報道。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于提供一種表達豬流行性腹瀉病毒S基因的豬源BVDV重組病毒及應(yīng)用，該豬源BVDV重組病毒可表達PEDV S外源蛋白，同時用于PEDV和BVDV的防控。此外，豬源BVDV重組感染性克隆為其他外源基因提供了合適的插入位點，可用作重組病毒載體，為后續(xù)體外修飾RNA、外源基因的插入、重組病毒的制備等研究提供有效的技術(shù)平臺。

為了達到上述目的，本發(fā)明提供如下技術(shù)方案：

一種表達豬流行性腹瀉病毒S基因的豬源BVDV重組病毒，其在豬源BVDV的C核衣殼蛋白N端插入了豬流行性腹瀉病毒S基因的中和抗原表位序列。

進一步，所述豬流行性腹瀉病毒S基因的中和抗原表位序列的插入位點為豬源BVDV的C核衣殼蛋白N端的第7和第8個氨基酸之間。

又，所述豬源BVDV重組病毒的基因序列如SEQ ID NO.1所示。

本發(fā)明提供一種含有所述重組病毒基因的豬源BVDV重組感染性克隆質(zhì)粒。

進一步，所述的豬源BVDV重組感染性克隆質(zhì)粒為pASH-dS312。