[發明專利]用于脆性X綜合征致病基因檢測的校準品及其應用

在審

• 申請號: 201810440187.5
• 申請日: 2018-05-09
• 公開（公告）號: CN108546755A
• 公開（公告）日: 2018-09-18
• 發明（設計）人: 吳英松;李明;楊學習;楊旭;王文玉
• 申請（專利權）人: 廣州市達瑞生物技術股份有限公司
• 主分類號: C12Q1/6883
• 分類號: C12Q1/6883
• 代理公司: 廣州三環專利商標代理有限公司 44202
• 代理人: 郝傳鑫;羅堯

本發明公開了一種用于脆性X綜合征致病基因檢測的校準品及其應用，所述校準品中含有至少6個CGG序列重復數不同的FMR1基因片段。采用本發明的脆性X綜合征致病基因檢測校準品，應用熒光PCR?毛細管電泳法對FMR1基因CGG重復數進行檢測，利用校準品及檢測的結果構建標準曲線，從而計算出同批次檢測樣本的CGG重復數，該方法顯著提高了脆性X綜合征致病基因檢測的分辨度，使脆性X綜合征的檢測方法更為完善和準確。

技術領域

本發明涉及脆性X綜合征基因檢測技術領域，尤其是一種用于脆性X綜合征致病基因檢測的校準品及其應用。

背景技術

脆性X綜合征是僅次于先天愚型的最常見的遺傳性智力障礙類型，發病率為1/2500～1/5000，在我國智力低下患者中發病率約為6.3％。該病發病存在明顯的性別差異，男性發病率較高，據統計，男性發病率為1:4000，女性發病率為1:8000～1:6000。其主要特征為中度至重度智力低下，且隨著年齡增加病情有加重的趨勢，其他臨床表現為特殊面容，如長臉或招風耳，青春期以后出現大睪丸，許多患者還表現為沖動、多動、焦慮、恐懼社交、語言呆板等孤獨癥行為。FXS嚴重危害兒童生長發育，早發現、早治療、早干預能顯著改善患兒預后，且可為家系遺傳提供產前遺傳咨詢，避免家族中再次出現同樣的患者，對家庭幸福美滿、社會人口素質提高有重大意義，具有不可估量的社會效益和經濟效益。

脆性X綜合征是X染色體DNA過度甲基化或完全改變所致的X連鎖不完全顯性遺傳病。FXS的致病基因為脆性X智力低下1號基因(FMR1)，絕大部分FXS是由于FMR1的(CGG)n重復序列過度擴展導致基因甲基化而造成的，只有極少數病例是由FMR1基因點突變或者是完全缺失而造成。正常人的CGG重復數為6～44，最常見的是29次和30次，重復數為55～200的成為“前突變”，重復數超過200的為“全突變”，而重復數為45～54的為“灰色區域”，介于“前突變”和“正常”之間，沒有臨床表現。

現有的脆性X綜合征檢測方法采用PCR、MLPA、Southern Blot等技術。但這些還具有一定的缺陷，如操作難度高、檢測耗時長、成本高等。除此之外，對FMR1基因CGG重復數的分辨度仍然不夠。基于PCR技術擴增的FMR1基因目的片段，毛細管電泳檢測擴增片段比傳統的瓊脂糖凝膠電泳分辨率更高，能夠分辨3～8bp以上的不同長度PCR片段，但不同批次運行也會帶來一定的誤差。

發明內容

基于上述問題，本發明的目的在于克服上述現有技術的不足之處而提供一種用于脆性X綜合征致病基因檢測的校準品，采用該標準品能避免現有技術中脆性X綜合征致病基因檢測的低分辨度問題，使脆性X綜合征的檢測方法更為完善和準確。

為實現上述目的，本發明采取的技術方案包括以下幾個方面：

在第一個方面，本發明提供了一種用于脆性X綜合征致病基因檢測的校準品，所述校準品中含有至少6個CGG序列重復數不同的FMR1基因片段。

優選地，所述校準品中含有6個CGG序列重復數不同的FMR1基因片段。

優選地，所述6個不同的FMR1基因片段的CGG序列重復數分別為23、31、46、53、77、117，由此，所述6個CGG序列重復數覆蓋了FMR1基因中正常型(CGG序列重復數6～54)以及CGG序列重復數≤117的前突變型(55～200)，同時校準品還可以檢測出FMR1基因的CGG序列重復數117～200前突變型和>200的全突變型(CGG序列重復數>200)。

優選地，所述重復數23的FMR1基因片段長度為297.80～298.99bp，重復數31的FMR1基因片段長度為321.73～322.91bp，重復數46的FMR1基因片段長度為365.23～366.37bp，重復數53的FMR1基因片段長度為388.42～389.61bp，重復數77的FMR1基因片段長度為458.33～461.86bp，重復數117的FMR1基因片段長度為574.36～575.52bp。