[發明專利]一種誘導金櫻子葉片直接產生不定芽及植株再生的方法

有效

• 申請號: 201810438916.3
• 申請日: 2018-05-09
• 公開（公告）號: CN108719061B
• 公開（公告）日: 2021-09-28
• 發明（設計）人: 王長泉;咸宏康;劉金義
• 申請（專利權）人: 南京農業大學
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 南京天華專利代理有限責任公司 32218
• 代理人: 徐冬濤;邢賢冬

本發明公開了一種誘導金櫻子葉片直接產生不定芽及植株再生的方法，包括：切取金櫻子無菌苗的帶小柄單葉片接種到誘導培養基上暗培養8?10天，暗培養后的葉片轉移到光照時間16h/d、溫度為25±2℃條件下培養25?40天，葉柄處產生不定芽；切割分離不定芽，轉移到增殖培養基中繼續培養，生長20?30天左右獲得大量叢生芽；將叢生芽切割分離成單芽體，轉移到壯苗培養基中壯苗25?40天，芽苗可以生長成株高3?5cm的幼苗，然后轉移到生根培養基中誘導生根，20?30天后生根率達95％以上；將生根的幼苗轉移到盆栽基質培養，得到完整金櫻子成年植株。本發明方法簡便易行、誘導周期短、再生植株健壯并且生產迅速。

技術領域

本發明屬于生物工程技術領域，涉及一種利用組織培養技術由葉片直接誘導不定芽分化和植株再生的方法，具體涉及一種誘導金櫻子葉片直接產生不定芽及植株再生的方法。

背景技術

金櫻子(Rosa laevigata Michx.)是薔薇科薔薇屬藥食兩用植物，其根、莖、花、果均可入藥，多處于半野生狀態。隨著現代生物技術的發展，更多科研人員采用組織培養的方法來培養金櫻子，然而利用金櫻子離體葉片獲得再生植株存在較大困難，國內主要是利用腋芽和莖尖進行快繁^[1-2]，但是通過金櫻子離體葉片獲得完整株系尚未見報道。

參考文獻：

[1]、廖莉莉,藍祖栽,凌征柱.金櫻子組織培養及植株再生研究[J].現代中藥研究與實踐,2010(6):22-24.

[2]、朱曉仙,胡海濤,楊玲.金櫻子的組織培養與快速繁殖[J].江西林業科技,2011(4):31-32.

發明內容

本發明的目的是提供一種利用組織培養技術由金櫻子葉片直接誘導再生不定芽，進而再生植株的方法。該種方法簡便易行、誘導周期短、再生植株健壯并且生產迅速，為金櫻子的遺傳轉化奠定了基礎。

本發明的目的是通過以下技術方案實現的：

一種誘導金櫻子葉片直接產生不定芽及植株再生的方法，包含如下步驟：

步驟(1)、不定芽誘導：剪取金櫻子組培苗的復葉，再切割成帶小葉柄的單個葉片，考慮到葉片正面包含葉綠體較多，正面對著光源能更好的進行光合作用，背面含有氣孔能更好吸收培養基養分，將帶柄的單個葉片背面朝下直接接種到不定芽誘導培基進行暗培養，暗培養8-10天，既能獲得不定芽又使褐化率保持在較低程度；將暗培養后的葉片轉移到正常光周期條件下繼續培養25-40天，部分葉柄處的膨大并長出淡綠色的芽點，隨后芽點萌發，抽枝展葉，產生不定芽；

步驟(2)、不定芽增殖：切割分離葉柄處產生的不定芽，轉移到增殖培養基中繼續培養，生長20-30天產生大量叢生芽，增殖系數在3.5左右；

步驟(3)、壯苗培養：將叢生芽切割分離成單芽體，轉移到壯苗培養基中，壯苗培養25-40天，芽苗生長成3-5cm高的幼苗；

步驟(4)、將幼苗轉移到生根培養基中誘導生根，培養20-30天后生根率達95％以上，生根的幼苗即有了更強的生存和環境適應能力；

步驟(5)、選擇根系發達、生長健壯、株高不低于5cm的幼苗，洗凈根部粘帶的培養基，迅速移到盆栽基質中，室內培養1個月，再轉移至自然光照下培養培養2-5個月，得到完整金櫻子成年植株。移栽前一般不需要開蓋煉苗，只要前期保證充足的水分，移栽成活率可達100％；