[發(fā)明專利]一種誘導(dǎo)金櫻子葉片直接產(chǎn)生不定芽及植株再生的方法有效
| 申請?zhí)枺?/td> | 201810438916.3 | 申請日： | 2018-05-09 |
| 公開（公告）號： | CN108719061B | 公開（公告）日： | 2021-09-28 |
| 發(fā)明（設(shè)計）人： | 王長泉;咸宏康;劉金義 | 申請（專利權(quán)）人： | 南京農(nóng)業(yè)大學(xué) |
| 主分類號： | A01H4/00 | 分類號： | A01H4/00 |
| 代理公司： | 南京天華專利代理有限責(zé)任公司 32218 | 代理人： | 徐冬濤;邢賢冬 |
| 地址： | 211225 江蘇省南京市溧*** | 國省代碼： | 江蘇;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 一種 誘導(dǎo) 金櫻子 葉片 直接 產(chǎn)生 不定 植株 再生 方法 | ||
1.一種誘導(dǎo)金櫻子葉片直接產(chǎn)生不定芽及植株再生的方法，其特征在于包含如下步驟：
步驟(1)、不定芽誘導(dǎo)：剪取金櫻子組培苗的無菌復(fù)葉，再切割成帶小葉柄的單個葉片，將帶柄的單個葉片背面朝下接種到不定芽誘導(dǎo)培養(yǎng) 基進行暗培養(yǎng)，所述的不定芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基為1/2MS+NAA0-0.0005mg/L+TDZ1.5mg/L+CH（酸水解干酪素）100mg/L+AgNO310mg/L+蔗糖30g/L+瓊脂7.5g/L，pH值5.8-6.0；暗培養(yǎng)8-10天；將暗培養(yǎng)后的葉片轉(zhuǎn)移到正常光周期條件下培養(yǎng)25-40天，葉柄處產(chǎn)生不定芽；
步驟(2)、不定芽增殖：切割分離不定芽，轉(zhuǎn)移到增殖培養(yǎng)基中繼續(xù)培養(yǎng)，培養(yǎng)20-30天產(chǎn)生叢生芽；所述的增殖培養(yǎng)基為MS+NAA 0.1mg/L+6-BA 1mg/L+蔗糖30g/L+瓊脂7.5g/L，pH值5.8-6.0；
步驟(3)、壯苗培養(yǎng)：將叢生芽切割分離成單芽體，轉(zhuǎn)移到壯苗培養(yǎng)基中，壯苗培養(yǎng)25-40天，芽苗生長成 幼苗；所述的壯苗培養(yǎng)基不添加任何激素，為MS+蔗糖30g/L+瓊脂7.5g/L，pH值5.8-6.0；
步驟(4)、誘導(dǎo)生根：將幼苗轉(zhuǎn)移到生根培養(yǎng)基中誘導(dǎo)生根，培養(yǎng)20-30天后獲得生根的幼苗；所述的生根培養(yǎng)基為MS+NAA 0.1mg/L+蔗糖30g/L+瓊脂7.5g/L，pH值5.8-6.0；
步驟(5)、選擇根系發(fā)達、生長健壯、株高不低于5cm的幼苗，洗凈根部粘帶的培養(yǎng)基，移栽到盆栽基質(zhì)中，室內(nèi)培養(yǎng)1個月，再轉(zhuǎn)移至自然光照下培養(yǎng)，得到完整金櫻子成年植株。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的誘導(dǎo)金櫻子葉片直接產(chǎn)生不定芽及植株再生的方法，其特征在于步驟(1)中，所述的暗培養(yǎng)的溫度為25±2℃；所述的正常光周期培養(yǎng)條件為光照時間16h/d、光照強度為5000-10000lx、培養(yǎng)溫度為25±2℃。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的誘導(dǎo)金櫻子葉片直接產(chǎn)生不定芽及植株再生的方法，其特征在于步驟(1)中，所述的不定芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基為1/2MS+NAA0.0005mg/L+TDZ1.5mg/L+CH100mg/L+AgNO310mg/L+蔗糖30g/L+瓊脂7.5g/L，pH值5.8-6.0。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的誘導(dǎo)金櫻子葉片直接產(chǎn)生不定芽及植株再生的方法，其特征在于步驟(2)中，增殖培養(yǎng)條件為光照時間16h/d、光照強度5000-10000lx、溫度25±2℃。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的誘導(dǎo)金櫻子葉片直接產(chǎn)生不定芽及植株再生的方法，其特征在于步驟(3)中，所述的壯苗培養(yǎng)條件為光照時間16h/d、光照強度5000-10000lx，溫度25±2℃。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的誘導(dǎo)金櫻子葉片直接產(chǎn)生不定芽及植株再生的方法，其特征在于步驟(4)中，所述的生根培養(yǎng)條件為光照時間16h/d、光照強度5000-10000lx、溫度25±2℃。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的誘導(dǎo)金櫻子葉片直接產(chǎn)生不定芽及植株再生的方法，其特征在于步驟(5)中，所述的盆栽基質(zhì)的原料為泥炭土:蛭石:珍珠巖體積比為1:2:1，各原料121℃高溫滅菌30分鐘，冷卻后混勻；
所述的室內(nèi)培養(yǎng)條件為光照時間16h/d、光照強度5000-10000lx，溫度25±2℃。
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