[發明專利]基于微流控芯片檢測游離三碘甲狀腺原氨酸fT3試劑盒及制備和檢測方法

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• 申請號: 201810437803.1
• 申請日: 2018-05-09
• 公開（公告）號: CN108931656A
• 公開（公告）日: 2018-12-04
• 發明（設計）人: 許行尚;杰弗瑞·陳;朱宗哲
• 申請（專利權）人: 南京嵐煜生物科技有限公司
• 主分類號: G01N33/78
• 分類號: G01N33/78;G01N33/532;G01N33/533
• 代理公司: 南京正聯知識產權代理有限公司 32243
• 代理人: 王素琴

本發明公開了一種基于微流控芯片的游離三碘甲狀腺原氨酸fT3試劑盒及制備和檢測方法，該試劑盒的制備方法，包括以下步驟：(1)微流控芯片包被；(2)熒光微球標記；(3)微流控芯片組裝；(4)定標品的制備；(5)得基于微流控芯片的游離三碘甲狀腺原氨酸fT3試劑盒。制備得到的游離三碘甲狀腺原氨酸fT3試劑盒采用競爭法進行測定，選取高靈敏度的時間分辨熒光物作為標記物，在熒光微球上進行抗原的標記，利用免疫競爭反應進行分析檢測，所制備的試劑性能可達同等化學發光試劑的水平。免疫反應后，使用清洗液將多余組分完全去除后，對免疫反應結合上的熒光微球進行檢測讀數，避免了引入顯色液進入芯片內部反應不充分或者顯色后讀數不及時的問題。

技術領域

本發明屬于免疫檢測領域，尤其是涉及一種基于微流控芯片檢測游離三碘甲狀腺原氨酸fT3試劑盒及制備和檢測方法。

背景技術

微流控芯片技術是以微管道網絡為結構特征，采用微加工技術在幾平方厘米大小的芯片上刻蝕出微管道網絡和其它功能單元，從而制備出包含進樣、反應、分離、檢測于一體的快速、高效、低耗的微型分析裝置。微流控芯片在檢測平臺中具有試劑消耗少，反應時間短，自動化程度高的特點。在目前的研究中，芯片的微型化卻給前期樣品分離和配套集成帶來不少困難，同時在樣品固定，洗脫等方面也存在不少問題。

微流控芯片檢測主要有以下幾點優勢：

1)器件微小且沒有對人為操作，試劑消耗量很少；

2)通過設計不同微流路實現在同一芯片中不同試劑的混合反應，減少繁瑣的生物實驗操作縮短檢測所需時間；

3)微流控芯片可與電路接合實現自動化控制；

4)微流控芯片以及配套檢測設備體積小巧，易于便攜。

三碘甲狀腺原氨酸(T3)是直接由甲狀腺合成和分泌(占大約20％)的，以及外圍T4轉化為T3(占大約80％)的一種激素。T3是應答腦垂體激素TSH(促甲狀腺激素)而分泌并進入血液循環的。T3的分泌受甲狀腺、腦垂體和下丘腦參與的負反饋機制的調節。

在循環中，99.7％結合在運轉蛋白上的T3是可逆的，其中主要是甲狀腺素結合球蛋白(TBG)和少量的白蛋白以及甲狀腺結合前蛋白(TBPA)結合。不與運轉蛋白結合或者說游離狀態的T3具有代謝活性，而與運轉蛋白結合的T3則不具有代謝活性，作為游離T3的儲備物存在。

體內游離T3水平的高低與T3的分泌以及代謝有關，在甲狀腺技能減退和甲狀腺亢進的患者中，其體內游離T3水平變化跟隨總T3水平的變化水平。當由于TBG等T3結合蛋白水平發生變化而使得總T3水平發生改變時，對體內游離T3水平的測定就十分有用。健康人體內的TBG水平通常都會保持相對穩定，在某些條件下，會使得TBG的水平發生改變。在上述情形中，游離T3水平不會發生改變，總T3水平的變化與TBG的變化一致。

在中國專利文獻CN104614521A中公開了一種微流控芯片，包括柔性聚合物層和基片，柔性聚合物層和基片鍵合在一起，所述芯片中設有微溝道系統，所述微溝道系統包括緩沖液入口、樣品入口、磁珠入口、廢液出口、微閥、微泵區、磁珠塞區、循環區及檢測區。

上述技術方案采用靈敏度較低的比濁法，檢測免疫磁珠和待測物之間的免疫反應所形成的絡合物進行反應物前后的濁度變化，來進行判定待測物的濃度。相對而言，在采用免疫比濁這一方法學來說，由于不需要額外的配對抗體以及發光標記物，因此整體芯片結構設計較為簡單。通過磁場在芯片溝道中形成的特定區域富集磁珠，樣品持續通過此部分磁珠塞后與另一測磁珠結合，從而形成兩個以上的磁珠團聚。