[發明專利]一種海氏腸球菌玻片凝集血清抗體檢測試劑盒、制備方法及其應用

在審

• 申請號: 201810436310.6
• 申請日: 2018-05-09
• 公開（公告）號: CN108646018A
• 公開（公告）日: 2018-10-12
• 發明（設計）人: 陳啟偉;鄭福英;丁耀忠
• 申請（專利權）人: 中國農業科學院蘭州獸醫研究所
• 主分類號: G01N33/569
• 分類號: G01N33/569;G01N33/68
• 代理公司: 北京中譽威圣知識產權代理有限公司 11279
• 代理人: 席勇

本發明涉及一種海氏腸球菌玻片凝集血清抗體檢測試劑盒、制備方法及其應用，所述試劑盒中包括：(1)海氏腸球菌玻片凝集試驗抗原；(2)標準陽性血清；(3)標準陰性血清；本發明試劑盒操作簡單方便，可用來檢測海氏腸球菌血清抗體，適合在各基層獸醫有關單位以及養殖場廣泛推廣使用；本發明中的試劑盒在檢測樣品時只需要使用簡單耗材，不需要任何儀器設備，即使在條件簡陋的養殖場也可以使用；結果判定眼觀即可；操作人員不需要專業知識，不必接受專業培訓，只參照說明書就可進行檢測，有利于在基層廣泛使用。

技術領域

本發明屬于微生物的檢測試劑技術領域，具體涉及一種海氏腸球菌玻片凝集血清抗體檢測試劑盒、制備方法及其應用。

背景技術

海氏腸球菌(Enterococcus hirae)屬于腸球菌屬，是一種廣泛分布在陸生動物和禽類中的一種革蘭氏陽性球菌，容易抑制小雞的生長，造成動物的心膜炎以及感染人類后出現敗血癥，同時，在動物體內往往導致出現嚴重的耐藥性。目前，海氏腸球菌幾乎很少有感染人的報道。但是，近期在美國出現的病例表明，由于人類感染海氏腸球菌而發展成危及生命的疾病。該菌感染后與多種臨床癥狀相關，包括心內膜炎，急性腎盂腎炎，急性膽囊炎，自發性細菌性腹膜炎等。因此該病原體具有重要的公共安全臨床意義。目前國內外關于海氏腸球菌的研究報道甚少，對于海氏腸球菌的檢測技術主要依靠實驗室細菌分離、PCR 分子生物學鑒定，對于海氏腸球菌的血清抗體檢測技術在國內外均未見報道。鑒于此，有必要開發一種可檢測海氏腸球菌血清抗體的免疫學技術，可滿足開展對海氏腸球菌快速有效的血清學診斷技術，減少對海氏腸球菌感染造成的誤診及漏診，從而對海氏腸球菌在畜牧生產中的感染狀況進行調查。

發明內容

為了解決現有技術存在的上述問題，本發明提供了一種海氏腸球菌玻片凝集血清抗體檢測試劑盒。

本發明的另一目的是提供一種海氏腸球菌玻片凝集血清抗體檢測試劑盒的制備方法。

本發明的另一目的是提供一種海氏腸球菌玻片凝集血清抗體檢測試劑盒在檢測海氏腸球菌血清抗體中的應用。

本發明所采用的技術方案為：一種海氏腸球菌玻片凝集血清抗體檢測試劑盒，所述試劑盒包括：(1)海氏腸球菌玻片凝集試驗抗原；(2)標準陽性血清；(3)標準陰性血清。

一種海氏腸球菌玻片凝集血清抗體檢測試劑盒的制備方法，包括如下步驟：

步驟A、海氏腸球菌玻片凝集試驗抗原的制備：將海氏腸球菌進行增菌培養后，進行甲醛滅活，再離心取沉淀，用5g/L(w/v)石炭酸生理鹽水懸浮得到；

步驟B、標準陽性血清的制備：取海氏腸球菌進行增菌培養后，離心取沉淀，進行水浴滅活，與弗氏完全佐劑混勻，免疫未感染過海氏腸球菌的健康鴨，從鴨翅靜脈采血分離血清，用瓊脂擴散試驗檢測抗體效價，效價達1:32以上即為標準陽性血清；

步驟C、標準陰性血清的制備：取健康鴨的頸動脈血，收集至大離心管中，室溫過夜，離心，取上清，經瓊脂擴散試驗檢測，海氏腸球菌血清抗體為陰性，即得到標準陰性血清；

步驟D、將上述制備的海氏腸球菌玻片凝集試驗抗原、標準陽性血清、標準陰性血清組裝成海氏腸球菌玻片凝集血清抗體檢測試劑盒。

進一步地，所述步驟A中制備海氏腸球菌玻片凝集試驗抗原的海氏腸球菌菌株保存于中國典型培養物保藏中心，保藏編號為CCTCC No:M 2018115。

進一步地，所述步驟A中制備海氏腸球菌玻片凝集試驗抗原的滅活甲醛濃度為3‰～4‰(v/v)，在37℃滅活24h～30h，每間隔2h搖晃菌瓶

一種海氏腸球菌玻片凝集試驗抗原檢測血清抗體的方法，包括如下步驟：

步驟一、取出4℃保存的海氏腸球菌玻片凝集試驗抗原，恢復至室溫，充分搖勻；