[發明專利]一種海氏腸球菌玻片凝集血清抗體檢測試劑盒、制備方法及其應用

在審

• 申請號: 201810436310.6
• 申請日: 2018-05-09
• 公開（公告）號: CN108646018A
• 公開（公告）日: 2018-10-12
• 發明（設計）人: 陳啟偉;鄭福英;丁耀忠
• 申請（專利權）人: 中國農業科學院蘭州獸醫研究所
• 主分類號: G01N33/569
• 分類號: G01N33/569;G01N33/68
• 代理公司: 北京中譽威圣知識產權代理有限公司 11279
• 代理人: 席勇

1.一種海氏腸球菌玻片凝集血清抗體檢測試劑盒，其特征在于：所述試劑盒包括：(1)海氏腸球菌玻片凝集試驗抗原；(2)標準陽性血清；(3)標準陰性血清。

2.一種制備權利要求1中的海氏腸球菌玻片凝集血清抗體檢測試劑盒的制備方法，其特征在于，包括如下步驟：

步驟A、海氏腸球菌玻片凝集試驗抗原的制備：將海氏腸球菌進行增菌培養后，進行甲醛滅活，再離心取沉淀，用5g/L(w/v)石炭酸生理鹽水懸浮得到；

步驟B、標準陽性血清的制備：取海氏腸球菌進行增菌培養后，離心取沉淀，進行水浴滅活，與弗氏完全佐劑混勻，免疫未感染過海氏腸球菌的健康鴨，從鴨翅靜脈采血分離血清，用瓊脂擴散試驗檢測抗體效價，效價達1:32以上即為標準陽性血清；

步驟C、標準陰性血清的制備：取健康鴨的頸動脈血，收集至大離心管中，室溫過夜，離心，取上清，經瓊脂擴散試驗檢測，海氏腸球菌血清抗體為陰性，即得到標準陰性血清；

步驟D、將上述制備的海氏腸球菌玻片凝集試驗抗原、標準陽性血清、標準陰性血清組裝成海氏腸球菌玻片凝集血清抗體檢測試劑盒。

3.如權利要求2所述的制備權利要求1中的海氏腸球菌玻片凝集血清抗體檢測試劑盒的制備方法，其特征在于，所述步驟A中制備海氏腸球菌玻片凝集試驗抗原的海氏腸球菌菌株保存于中國典型培養物保藏中心，保藏編號為CCTCC No:M 2018115。

4.如權利要求2所述的制備權利要求1中的海氏腸球菌玻片凝集血清抗體檢測試劑盒的制備方法，其特征在于，所述步驟A中制備海氏腸球菌玻片凝集試驗抗原的滅活甲醛濃度為3‰～4‰，在37℃滅活24h～30h，每間隔2h搖晃菌瓶。

5.如權利要求1所述的一種海氏腸球菌玻片凝集血清抗體檢測試劑盒在檢測海氏腸球菌血清抗體中的應用。

6.一種海氏腸球菌玻片凝集試驗抗原檢測血清抗體的方法，其特征在于，包括如下步驟：

步驟一、取出4℃保存的海氏腸球菌玻片凝集試驗抗原，恢復至室溫，充分搖勻；

第二步，在玻璃板上分別滴加待檢血清、標準陽性血清、標準陰性血清各25ul；

第三步，分別加入充分搖勻的海氏腸球菌玻片凝集試驗抗原25μl，充分混勻；

第四步，室溫靜置2～5分鐘，觀察海氏腸球菌玻片凝集試驗抗原與對應血清的凝集現象；

第五步，根據其是否凝集來判定陽性、陰性結果。