[發明專利]獲得性細胞克隆的檢測試劑盒及其使用方法

在審

• 申請號: 201810433109.2
• 申請日: 2018-05-08
• 公開（公告）號: CN108611415A
• 公開（公告）日: 2018-10-02
• 發明（設計）人: 陸國輝
• 申請（專利權）人: 陸國輝
• 主分類號: C12Q1/6886
• 分類號: C12Q1/6886;C12Q1/6841;C12N15/11
• 代理公司: 廣州華進聯合專利商標代理有限公司 44224
• 代理人: 林青中;萬志香

本發明涉及一種用于原發性腫瘤治療后檢測用的獲得性細胞克隆的檢測試劑盒及其使用方法。該獲得性細胞克隆的檢測試劑盒包括第一熒光探針試劑、第二熒光探針試劑及第三熒光探針試劑；其中，第一熒光探針試劑中兩條檢測探針的序列分別如SEQ ID NO:1和SEQ ID NO:2所示，第二熒光探針試劑中兩條檢測探針的序列分別如SEQ ID NO:3和SEQ ID NO:4所示，第三熒光探針試劑中檢測探針的序列如SEQ ID NO:5所示。該獲得性細胞克隆的檢測試劑盒及其使用方法可用于對骨髓樣本的ACC情況，尤其是SACC情況進行檢測和隨訪跟蹤，檢測結果可以結合臨床性指標、病理性指標、流式分型指標，為tMDS和tAML的臨床早期診斷提供重要依據和參考，更好地指導臨床醫生對治療相關性骨髓瘤進行早期診斷干預和治療。

技術領域

本發明涉及分子生物學領域，尤其是涉及一種獲得性細胞克隆的檢測試劑盒及其使用方法。

背景技術

原發性腫瘤的傳統治療方法主要分為放療、化療或者兩者一起，而化療又主要包括烷化劑療法、嘌呤類似物療法、蒽醌療法、利妥昔單抗療法等。傳統的治療往往會對病人正常細胞產生毒性作用而造成嚴重的損害，易導致治療相關性髓細胞瘤(therapy-relatedmyeloid neoplasm，tMN)的發生，如治療相關性骨髓增生異常綜合征(therapy-relatedmyelodysplastic syndrome，tMDS)和治療相關性急性髓細胞白血病(therapy-relatedacute myeloid leukemia，tAML)，一般發生于原發性腫瘤治療后10年內，中位期為5-7年，根據美國的相關統計，10年的累計發病率約為8％-10％。隨著對原發性腫瘤的早發現、早治療、以及有效新腫瘤治療藥物方案的使用，經治療的腫瘤病人的存活期延長，治療相關性髓細胞瘤的病例隨之增多。在美國，對治療相關性髓細胞瘤的早期診斷和治療早已被列為臨床腫瘤病常規管理。近年來，治療相關性髓細胞瘤在中國也開始被關注，得到越來越多的臨床醫生和病理學家的重視，因為治療相關性髓細胞瘤難治，病人的死亡率高且存活期短。

治療相關性髓細胞瘤的特點是難治性和耐藥性而導致的短生存期，因而治療相關性髓細胞瘤的早期診斷和干預，有著非常重要的臨床意義。現階段的治療相關性髓細胞瘤診斷依據主要包括臨床性指標、病理性指標、流式分型指標和細胞遺傳分型指標。由于治療相關性髓細胞瘤是一種復雜的病征，臨床診斷時需要結合多種指標的檢測結果綜合分析，單一指標的檢測結果往往只能作為中間診斷結果或參考結果用于輔助分析。

獲得性細胞克隆(acquired cytogenetic clone，ACC，又稱為獲得性細胞遺傳克隆或獲得性細胞基因組克隆等)是一種細胞遺傳分型指標。當異常的細胞遺傳克隆仍然處于低水平時，其細胞基因組(cytogenomic)改變仍然處于沉默狀態，而沒有導致臨床表型腫瘤的發生，即缺乏病理細胞形態改變和缺乏任何臨床表型，把此正常臨床狀態下的新的獲得性細胞克隆稱為沉默型獲得性細胞克隆(silent acquired cytogenetic clone，SACC)；當新的獲得性細胞克隆發展到一定的水平時，相關的異常細胞基因組功能被激活并導致治療相關性髓細胞瘤的產生，如圖1所示，此克隆稱為激活型獲得性細胞克隆(activeacquired cytogenetic clone，AACC)。從原發性腫瘤治療開始到AACC發生之間的時間段稱為ACC發生期。SACC的發生期比AACC的發生期要長，前者為80個月而后者為47個月。從SACC發展到AACC的過程，血常規的變化首先表現在血紅蛋白和血小板數降低，繼之發生骨髓的細胞數變化。

在細胞遺傳分型指標上，世界衛生組織(WHO)于2008年提出了骨髓增生異常綜合征(MDS)的初步判定主要依據：7號染色體長臂缺失、5號染色體長臂缺失和13號染色體長臂缺失，分別簡寫為：del(7q)、del(5q)和del(13q)；或者各自相關的7號、5號和13號染色體的單體，分別簡寫為：-7、-5和-13；或者其他少見的異常細胞遺傳克隆。