[發(fā)明專利]一種番茄紅素高產(chǎn)菌株、其制備方法及應用有效
| 申請?zhí)枺?/td> | 201810433054.5 | 申請日： | 2018-05-08 |
| 公開（公告）號： | CN108588106B | 公開（公告）日： | 2022-03-11 |
| 發(fā)明（設(shè)計）人： | 郭美錦;韋炎龍;方宏清;洪琦;莊英萍;儲炬 | 申請（專利權(quán)）人： | 華東理工大學 |
| 主分類號： | C12N15/70 | 分類號： | C12N15/70;C12N1/21;C12N15/52;C12N15/53;C12N15/54;C12N15/60;C12N15/61;C12P5/02;C12R1/19 |
| 代理公司： | 上海專利商標事務(wù)所有限公司 31100 | 代理人： | 陳靜 |
| 地址： | 200237 上*** | 國省代碼： | 上海;31 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 一種 番茄 高產(chǎn) 菌株 制備 方法 應用 | ||
1.一種提高番茄紅素產(chǎn)量的方法，其特征在于，所述方法包括：
(1)將表達元件GC逆時針整合到大腸桿菌DH06基因組非必需區(qū)23區(qū)，將表達元件S1順時針整合到非必需區(qū)64區(qū)，將表達元件ES順時針整合到非必需區(qū)57區(qū)，利用同源重組方法將來源于E.coli BL21(AI)基因組的T7RNA聚合酶基因整合到araB位點；將表達元件GC整合到非必需區(qū)8區(qū)；將表達元件GC整合到lpxM位點；將表達元件S1整合到非必需區(qū)58區(qū)；獲得的菌株包括：單拷貝ES元件，該ES元件包括乙酰輔酶A-乙酰轉(zhuǎn)移酶/3-羥基-3-甲基戊二酸單酰輔酶A還原酶基因和3-羥基-3-甲基戊二酸單酰輔酶A合成酶基因；雙拷貝S1元件，該S1元件包括甲羥戊酸激酶基因、磷酸甲羥戊酸激酶基因、甲羥戊酸焦磷酸脫羧酶基因和異戊烯基焦磷酸異構(gòu)酶基因；三拷貝GC元件，該GC元件包括雙功能短鏈異戊烯基焦磷酸合成酶基因、八氫番茄紅素合成酶基因和八氫番茄紅素脫氫酶基因；
(2)培養(yǎng)(1)的大腸桿菌，生產(chǎn)番茄紅素。
2.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，(2)中，以L-阿拉伯糖進行誘導培養(yǎng)。
3.如權(quán)利要求2所述的方法，其特征在于，在培養(yǎng)起始的第8～15小時進行誘導。
4.如權(quán)利要求3所述的方法，其特征在于，在培養(yǎng)起始的第12±1小時進行誘導。
5.一種重組的大腸桿菌，其特征在于，其通過以下方法制備：將表達元件GC逆時針整合到大腸桿菌DH06基因組非必需區(qū)23區(qū)，將表達元件S1順時針整合到非必需區(qū)64區(qū)，將表達元件ES順時針整合到非必需區(qū)57區(qū)，利用同源重組方法將來源于E.coliBL21(AI)基因組的T7 RNA聚合酶基因整合到araB位點；將表達元件GC整合到非必需區(qū)8區(qū)；將表達元件GC整合到lpxM位點；將表達元件S1整合到非必需區(qū)58區(qū)；從而，其中包括外源引入的如下表達元件：單拷貝ES元件，該ES元件包括乙酰輔酶A-乙酰轉(zhuǎn)移酶/3-羥基-3-甲基戊二酸單酰輔酶A還原酶基因和HMG-CoA合成酶基因；雙拷貝S1元件，該S1元件包括甲羥戊酸激酶基因、磷酸甲羥戊酸激酶基因、甲羥戊酸焦磷酸脫羧酶基因和異戊烯基焦磷酸異構(gòu)酶基因；三拷貝GC元件，該GC元件包括雙功能短鏈異戊烯基焦磷酸合成酶基因、八氫番茄紅素合成酶基因和八氫番茄紅素脫氫酶基因。
6.一種用于生產(chǎn)番茄紅素的試劑盒，其特征在于，所述試劑盒中包括權(quán)利要求5所述的重組的大腸桿菌。
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