[發明專利]一種青天葵球莖組織培養快速繁殖方法

在審

• 申請號: 201810431828.0
• 申請日: 2018-05-08
• 公開（公告）號: CN108522286A
• 公開（公告）日: 2018-09-14
• 發明（設計）人: 袁萍
• 申請（專利權）人: 佛山市元諾科技有限公司
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

本發明公開了一種青天葵球莖組織培養快速繁殖方法，其特征在于包括以下步驟：(1)外植體的取材與消毒；(2)無菌根狀莖的獲取；(3)根狀莖繁殖及球莖誘導一體化培養；(4)球莖煉苗移栽。與現有技術相比，本發明技術方案的有益效果是：本發明通過生物技術對青天葵球莖進行組織培養快速繁殖，在短時間內培育出大量可供大田栽培的青天葵種苗，顯著提高了青天葵種苗的繁殖系數和種苗質量，實現規模化生產，滿足生產上的需要。

技術領域

本發明涉及一種青天葵球莖組織培養快速繁殖方法。

背景技術

青天葵為蘭科植物毛唇芋蘭Nerviliafordii(Hance)Schitr的葉或帶球莖的葉，又名獨葉蓮、獨腳蓮、珍珠葉、墜千斤、鐵帽子、山米子、青蓮。性平，味苦，甘、涼。青天葵是我國珍稀瀕危植物，有清肺止咳，健脾消積，清熱解毒，消結散疬等功效，主治肺癆咯血，肺熱咳嗽，小兒肺炎，急性喉炎，口腔炎，咽喉腫痛，瘰疬，瘡瘍腫毒，跌打損傷等。青天葵主要以球莖進行繁殖，但繁殖系數極低，加之多年來人們滅絕式的挖掘，導致野生青天葵資源日益枯竭。然而，國內外市場的需求量卻逐年加大，青天葵已遠遠滿足不了市場的需求。

通過栽培試驗比較，發現青天葵組培球莖不僅能正常生長，而且在相同條件下栽培組培球莖優于野生球莖。因此，如何利用現代生物技術通過優化青天葵組織培養條件，為青天葵組織培養規模化生產育苗提供技術支撐，從而更好的開發和利用青天葵藥用植物資源。

發明內容

本發明旨在提供一種青天葵球莖組織培養快速繁殖方法。

本發明為實現上述目的，采取以下技術方案予以實現：

一種青天葵球莖組織培養快速繁殖方法，包括以下步驟：

(1)外植體的取材與消毒：青天葵球莖作為外植體進行消毒，首先將3-5滴洗潔精滴入裝有50ml自來水的燒杯中，把外植體放入燒杯輕輕攪拌5min，再用棉花清洗外植體表面污垢，自來水輕微流水沖洗20-30min；移置超凈工作臺，用75v/v％乙醇浸泡30s，無菌水沖洗一遍，然后再用添加了1-2滴吐溫-20的50ml濃度為0.1v/v％升汞消毒1-2min、無菌水沖洗3-5次，獲得無菌外植體，其中無菌水為經高高溫壓滅菌的蒸餾水；

(2)無菌根狀莖的獲取：將消毒好的外植體置于誘導培養基中進行不定芽誘導，發芽得到無菌根狀莖，所述誘導培養基是以1/2MS為基本培養基，添加5g·L^-1瓊脂，20g·L-1蔗糖，1.5mg·L-1的6-芐基腺嘌呤，0.3mg·L-1的萘乙酸，培養基pH值為6.8，培養條件為：溫度為25-27℃，光照強度1500-2000lux，光照時間為10-12h/d，培養時間為15-20d；

(3)根狀莖繁殖及球莖誘導一體化培養：切取2-3cm的無菌根狀莖置于添加5g·L-1瓊脂，25g·L-1蔗糖，1.0-2.0mg·L-1的6-芐基腺嘌呤、0.1-0.5mg·L-1的激動素(KT)、0.1-0.5mg·L-1的萘乙酸、蘋果汁100-200g·L-1的1/2MS培養基中培養獲得球莖，培養基pH值為6.8，培養條件為：溫度為25-27℃，光照強度1500-2000lux，光照時間為10-12h/d，培養時間為20d；

(4)球莖煉苗移栽：球莖進行煉苗后移植于基質中培養，再移栽至大田。

優選的，步驟(4)中的煉苗移栽按以下操作進行：經過步驟(3)獲得球莖，在室溫為20℃的室內進行煉苗，并在瓶中加水淹沒培養基，煉苗5-7d，取出球莖，洗凈培養基，再放入ABT生根粉配成100mg/·L-1的溶液中浸泡30min,浸泡后移栽到基質中生長30-40d，再移栽至大田。

優選的，所述基質為按優質塘泥：黃沙＝2：1的比例混合。

與現有技術相比，本發明技術方案的有益效果是：