[發明專利]基于磁性生物復合材料與鉛離子依賴性DNA酶的電化學生物傳感器檢測凝血酶的方法

有效

• 申請號: 201810424766.0
• 申請日: 2018-05-07
• 公開（公告）號: CN108802142B
• 公開（公告）日: 2020-08-21
• 發明（設計）人: 周學敏;朱春紅;朱婉瑩;徐磊
• 申請（專利權）人: 南京醫科大學
• 主分類號: G01N27/327
• 分類號: G01N27/327
• 代理公司: 北京思創大成知識產權代理有限公司 11614
• 代理人: 尹慧晶

1.一種基于磁性生物復合材料與鉛離子依賴性DNA酶的電化學生物傳感器檢測凝血酶的方法，其特征在于，包括如下步驟：

構建磁性生物復合材料Fe₃O₄@Au-S1/S2：將修飾有引物鏈S1的磁性Fe₃O₄@Au納米粒與凝血酶適配體S2共孵育；

鉛離子依賴性DNA酶的酶切輔助：向步驟a)構建的復合材料中加入不同濃度的凝血酶，在鉛離子依賴性DNA酶S3和鉛離子的輔助下共孵育；

電化學生物傳感器的構建：向步驟b)得到的反應物中加入亞甲藍MB，孵育反應得到樣品，將樣品通過磁性誘導吸附到磁性玻碳電極表面，測定MB的DPV信號，建立標準曲線；

樣品檢測：將未知濃度的凝血酶樣品，按上述方法檢測，測得DPV信號，代入標準曲線得到樣品中的凝血酶濃度；

S1的序列為5’-SH-C₆-GTA GAG AAG G rA TAT CAA CCA CAC CAA CC-3’，其中，rA為腺嘌呤核糖核苷酸，SEQ ID NO：1；S2的序列為5’-GGT TGG TGT GGT TGG-3’，SEQ ID NO：2；S3的序列為5’-TGG TTG ATA AAG CTG GCC GAG CCT CTT CTC TAC-3’，SEQ ID NO：3。

2.根據權利要求1所述的基于磁性生物復合材料與鉛離子依賴性DNA酶的電化學生物傳感器檢測凝血酶的方法，其中，步驟a)中，Fe₃O₄@Au-S1由Fe₃O₄與HAuCl₄制得，制備時Fe₃O₄與HAuCl₄質量比為1:3~1:7。

3.根據權利要求1所述的基于磁性生物復合材料與鉛離子依賴性DNA酶的電化學生物傳感器檢測凝血酶的方法，其中，體系中S1、S2和S3的濃度均為50-200 μM；步驟a)中，S1與S2的濃度比為1:0.8-1.2，加入S2孵育的時間為10~50 min，溫度為35-40℃；步驟b)中，孵育的時間為10~50 min，溫度為35-40℃。

4.根據權利要求1所述的基于磁性生物復合材料與鉛離子依賴性DNA酶的電化學生物傳感器檢測凝血酶的方法，其中，步驟b)中，凝血酶的濃度范圍為0~5 nM；步驟c)中，測定MB的電壓為-0.6~0.2 V。