[發明專利]GmMDH12基因在促進大豆結瘤固氮能力方面的應用

有效

• 申請號: 201810421922.8
• 申請日: 2018-05-04
• 公開（公告）號: CN108795956B
• 公開（公告）日: 2021-04-23
• 發明（設計）人: 田江;陳志堅;廖紅;梁翠月;白振龍
• 申請（專利權）人: 華南農業大學
• 主分類號: C12N15/53
• 分類號: C12N15/53;C12N9/04;C12N15/82;A01H5/00;A01H5/06;A01H6/54
• 代理公司: 廣州粵高專利商標代理有限公司 44102
• 代理人: 林麗明

1.核苷酸序列如SEQ ID NO:3所示的GmMDH12 基因在增強大豆根瘤蘋果酸合成方面的應用。

2.權利要求1中所述的GmMDH12 基因在促進大豆結瘤固氮能力方面的應用。

3.權利要求1中所述的GmMDH12基因在增強大豆植物根系結瘤能力和/或生物固氮能力方面的應用。

4.一種增強大豆植物根系結瘤能力和/或生物固氮能力的方法，其特征在于，將權利要求1中所述的GmMDH12基因在大豆中過表達。

5.根據權利要求4所述的方法，其特征在于，將權利要求1中所述的GmMDH12基因連接到載體PTF101S上得超量表達載體后，轉入農桿菌K599中，并利用農桿菌介導大豆轉基因復合植株進行轉化，獲得轉基因大豆。

6.根據權利要求5所述的方法，其特征在于，步驟如下：

S1.構建超量表達載體

以大豆根瘤cDNA為模板，用SEQ ID NO:14和SEQ ID NO:15所示上下游特異引物PCR擴增權利要求1中所述的GmMDH12基因序列；

PCR擴增片段回收測序無誤后，通過Sac I 和Xba I對擴增片段及目的載體PTF101S分別進行雙酶切后，將擴增片段連接到目的載體PTF101S上，得到表達載體；

S2.轉化：隨后通過凍融法將構建好的表達載體轉入到農桿菌K599中，利用農桿菌介導大豆轉基因復合植株進行轉化，得到轉基因復合植株。

7.根據權利要求6所述的方法，其特征在于，得到的轉基因復合植株需經過驗證：提取轉基因復合植株根系和根瘤RNA，反轉錄成cDNA，通過定量PCR檢測權利要求1中所述的GmMDH12基因表達效果。