[發明專利]豬圓環病毒3型病毒樣顆粒的制備方法及其應用

有效

• 申請號: 201810420766.3
• 申請日: 2018-05-04
• 公開（公告）號: CN108611359B
• 公開（公告）日: 2021-11-19
• 發明（設計）人: 陳博;金梅林;豆青;徐高原
• 申請（專利權）人: 武漢科前生物股份有限公司
• 主分類號: C12N15/70
• 分類號: C12N15/70;C07K14/01;C07K1/34;A61K39/12;A61P31/20
• 代理公司: 武漢宇晨專利事務所(普通合伙) 42001
• 代理人: 龔瑩瑩

1.豬圓環病毒3型病毒樣顆粒的制備方法制備的豬圓環病毒3型病毒樣顆粒在制備豬圓環病毒3型免疫劑中的應用，所述的應用包括下述步驟：

1）以f：5'-TATGGATCCACCGCGGGTACCTACTACACCA-3'和r：5'-GCGGCAAGCTTTTACAGAACGCTTTTGTAACGA-3'為上下游引物，以合成的PCV3-cap181為模板進行擴增；擴增產物和pET28a-SUMO經BamH I 和Hind III雙酶切后回收、連接，產物轉化到E.coli DH5ɑ感受態細胞，挑菌鑒定后抽提質粒，重組質粒命名為pET28a-8his×SUMO-cap181;

所述的PCV3-cap181基因的核苷酸序列為SEQ ID NO. 1所示;

2）將pET28a-8his×SUMO-cap181質粒轉入大腸桿菌表達菌株Rosetta(DE3)，命名為Rcap181;

3）Rcap181菌液接種到含卡那霉素的液體LB培養基中，37℃，200rpm搖床上培養3~4 h，使OD₆₀₀的值達到0.6；然后加入終濃度為0.1 mmol/L的IPTG，37℃，200rpm進行誘導表達3~4小時，隨后離心收集菌液；

4）破碎3）中收集的菌液的菌體，收集上清后過柱純化，將初純蛋白放入透析袋中透析后，切除SUMO標簽，即得CAP蛋白；

5）CAP蛋白置于緩沖液A中透析12~24 h；透析完成后，即得豬圓環病毒3型病毒樣顆粒；

所述的緩沖液A 的配方： 0.1 M 磷酸氫二鈉、0.1 M 磷酸二氫鈉、500 mM氯化鈉、10mMTris、50 mM氯化鉀、2 mM氯化鎂、5%的甘油、pH6.5。