[發(fā)明專(zhuān)利]豬圓環(huán)病毒3型病毒樣顆粒的制備方法及其應(yīng)用

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201810420766.3
• 申請(qǐng)日: 2018-05-04
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN108611359B
• 公開(kāi)（公告）日: 2021-11-19
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 陳博;金梅林;豆青;徐高原
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 武漢科前生物股份有限公司
• 主分類(lèi)號(hào): C12N15/70
• 分類(lèi)號(hào): C12N15/70;C07K14/01;C07K1/34;A61K39/12;A61P31/20
• 代理公司: 武漢宇晨專(zhuān)利事務(wù)所(普通合伙) 42001
• 代理人: 龔瑩瑩

1.豬圓環(huán)病毒3型病毒樣顆粒的制備方法制備的豬圓環(huán)病毒3型病毒樣顆粒在制備豬圓環(huán)病毒3型免疫劑中的應(yīng)用，所述的應(yīng)用包括下述步驟：

1）以f：5'-TATGGATCCACCGCGGGTACCTACTACACCA-3'和r：5'-GCGGCAAGCTTTTACAGAACGCTTTTGTAACGA-3'為上下游引物，以合成的PCV3-cap181為模板進(jìn)行擴(kuò)增；擴(kuò)增產(chǎn)物和pET28a-SUMO經(jīng)BamH I 和Hind III雙酶切后回收、連接，產(chǎn)物轉(zhuǎn)化到E.coli DH5ɑ感受態(tài)細(xì)胞，挑菌鑒定后抽提質(zhì)粒，重組質(zhì)粒命名為pET28a-8his×SUMO-cap181;

所述的PCV3-cap181基因的核苷酸序列為SEQ ID NO. 1所示;

2）將pET28a-8his×SUMO-cap181質(zhì)粒轉(zhuǎn)入大腸桿菌表達(dá)菌株Rosetta(DE3)，命名為Rcap181;

3）Rcap181菌液接種到含卡那霉素的液體LB培養(yǎng)基中，37℃，200rpm搖床上培養(yǎng)3~4 h，使OD₆₀₀的值達(dá)到0.6；然后加入終濃度為0.1 mmol/L的IPTG，37℃，200rpm進(jìn)行誘導(dǎo)表達(dá)3~4小時(shí)，隨后離心收集菌液；

4）破碎3）中收集的菌液的菌體，收集上清后過(guò)柱純化，將初純蛋白放入透析袋中透析后，切除SUMO標(biāo)簽，即得CAP蛋白；

5）CAP蛋白置于緩沖液A中透析12~24 h；透析完成后，即得豬圓環(huán)病毒3型病毒樣顆粒；

所述的緩沖液A 的配方： 0.1 M 磷酸氫二鈉、0.1 M 磷酸二氫鈉、500 mM氯化鈉、10mMTris、50 mM氯化鉀、2 mM氯化鎂、5%的甘油、pH6.5。