[發明專利]檢測引發血流感染病原體的成套試劑和試劑盒

有效

• 申請號: 201810418108.0
• 申請日: 2018-05-04
• 公開（公告）號: CN108384782B
• 公開（公告）日: 2022-05-31
• 發明（設計）人: 劉鵬;姜永強;李倩;張彥;律清宇;江華;鄭玉玲;趙尊全
• 申請（專利權）人: 中國人民解放軍軍事科學院軍事醫學研究院
• 主分類號: C12N15/11
• 分類號: C12N15/11;C12Q1/689;C12Q1/6869;C12Q1/14;C12Q1/04
• 代理公司: 北京紀凱知識產權代理有限公司 11245
• 代理人: 關暢;魏少偉

本發明公開了檢測引發血流感染病原體的成套試劑和試劑盒。本發明公開的成套試劑，由序列表中序列1?38的38條單鏈DNA組成，該成套試劑的可以用于檢測引發血流感染病原體、制備用于檢測引發血流感染病原體的試劑盒、檢測待測樣本是否含有引發血流感染病原體和制備用于檢測待測樣本是否含有引發血流感染病原體的試劑盒。實驗證明，本發明的成套試劑可同時檢測金黃色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、肺炎克雷伯菌、單核細胞增生李斯特菌4種常見血流感染病原體，并且檢測結果快速準確，具有很高的靈敏度和特異性，最低檢測限可達到10¹數量級CFU/ml。

技術領域

本發明涉及生物技術領域中，檢測引發血流感染病原體的成套試劑和試劑盒。

背景技術

血流感染(bloodstream infection，BSI)，是臨床上重癥感染性疾病之一，根據癥狀不同可分為敗血癥、膿毒癥和膿毒性休克，具有較高的發病率和致死率，其常見感染源包括細菌、真菌。現階段，血流感染診斷的金標準是血培養，通過生化方法或顯微鏡觀察確定病原體。但該方法耗時長，通常需要數天時間才能確定結果，且對于難培養或無法培養的病原體，則難以準確檢測。在缺乏準確診斷結果的情況下，臨床醫師為了緩解病癥，可能盲目使用抗生素，導致患者的生存率降低、細菌耐藥性的出現以及治療費用的增加等。

下一代測序(next-generation sequencing)的面世使得測序通量增加、成本降低，更適于臨床檢測。國內外已經有報道利用全基因組方法或16S rRNA測序方法直接對患者的全血樣本進行病原檢測。但血流感染患者中病原體含量較低，全血基因組測定時的隨機擴增將產生較多宿主基因數據，造成測序數據的浪費。而16S rRNA的測序方法只能將病原體鑒定到屬層級，對于一些親緣關系較近的病原體很難鑒定到種，無法為臨床治療提供有效的依據。Ampliseq技術是在測序的文庫制備過程中選擇特定的引物擴增富集特定的片段，擴增的片段長度與下游的測序儀的讀長相符可以直接用于測序分析。

發明內容

本發明所要解決的技術問題是如何檢測引發血流感染病原體，尤其是金黃色葡萄球菌(S.aureus)、表皮葡萄球菌(S.epidermidis)、單核細胞增多性李斯特氏菌(L.monocytogenes)和肺炎克雷伯菌(K.pneumoniae)。

為解決上述技術問題，本發明首先提供了一種成套試劑，所述成套試劑由序列表中序列1-38的38條單鏈DNA組成。

上述成套試劑中的各單鏈DNA均可獨立包裝，各單鏈DNA的摩爾數可相等。

所述成套試劑的用途可為如下(b1)、(b2)、(b3)或(b4)：

(b1)檢測引發血流感染病原體；

(b2)制備用于檢測引發血流感染病原體的試劑盒；

(b3)檢測待測樣本是否含有引發血流感染病原體；

(b4)制備用于檢測待測樣本是否含有引發血流感染病原體的試劑盒。

本發明還提供了所述成套試劑的下述任一應用：

(b1)檢測引發血流感染病原體；

(b2)制備用于檢測引發血流感染病原體的試劑盒；

(b3)檢測待測樣本是否含有引發血流感染病原體；

(b4)制備用于檢測待測樣本是否含有引發血流感染病原體的試劑盒。

本發明還提供了一種試劑盒，所述試劑盒包括所述成套試劑。

所述試劑盒的功能可為如下(b1)、(b2)、(b3)或(b4)：

(b1)檢測引發血流感染病原體；

(b2)制備用于檢測引發血流感染病原體的試劑盒；