[發明專利]用于檢測犬C-反應蛋白的免疫熒光層析檢測卡與制備方法

在審

• 申請號: 201810417752.6
• 申請日: 2018-05-04
• 公開（公告）號: CN108398565A
• 公開（公告）日: 2018-08-14
• 發明（設計）人: 湯永平;梁展鵬
• 申請（專利權）人: 廣州敏捷生物技術有限公司
• 主分類號: G01N33/68
• 分類號: G01N33/68;G01N33/577;G01N33/533;G01N33/558
• 代理公司: 廣州市科豐知識產權代理事務所(普通合伙) 44467
• 代理人: 王海曼

本發明公開了一種用于檢測犬C?反應蛋白的免疫熒光層析檢測卡與制備方法；旨在提供一種靈敏度高，檢測結果可靠的用于檢測犬C?反應蛋白的免疫熒光層析檢測卡；其技術要點包括底板，在底板上依次銜接有樣品墊、結合墊、硝酸纖維膜和吸水墊，所述結合墊上設有熒光微球標記的CRP單克隆抗體和熒光微球標記的羊抗雞IgY，所述的硝酸纖維膜設有一條包被雞IgY的質控C線，以及一條包被CRP單克隆抗體的檢測T線；屬于動物疫病檢測領域。

技術領域

本發明公開了一種免疫熒光層析檢測卡，具體地說，是一種用于檢測犬C-反應蛋白的免疫熒光層析檢測卡，本發明還公開了該免疫熒光層析檢測卡的制備方法。

背景技術

C反應蛋白(CRP)是機體非免疫系統的組成成分，在多種哺乳動物疾病的急性期有重要的診斷警示作用。CRP在肝臟的合成反應主要由IL-1、IL-6和TNF-α等炎癥因子所調節。CRP濃度受年齡、性別和體重的影響不大。在人類臨床醫學診斷中，CRP作為炎性或非炎性疾病的診斷標志物進行檢測已超過30年。在獸醫臨床上，犬CRP的檢測在臨床應用中也比較廣泛，包括急性感染性疾病的診斷和鑒別診斷、手術后感染的監測、抗生素療效的觀察、病程監測及預后判斷等。犬CRP對疾病敏感度高，能在疾病早期快速升髙，及時反映病情；而且CRP的濃度不受到抗生素及免疫抑制劑的影響，在治療中可以準確地對疾病的發展進行監測，在臨床診療中具有很高的價值。因此作為炎癥標記物，CRP在獸醫臨床上的作用日趨顯著，檢測犬CRP對臨床診斷、療效及預后觀察等具有重要價值。

CRP是由肝臟合成的一種能與肺炎鏈球菌C多糖反應形成復合物的急性時相反應蛋白。它由5個相同的亞基單位以非共價方式聯接，與人CRP不同，犬CRP的5個亞基中有兩個被糖基化。研究表明，各種抗其他物種CRP蛋白的抗血清，都不能和急性期犬血清或者分離的犬CRP發生交叉反應，說明其他物種CRP和犬CRP沒有共同的抗原性，這種現象也說明犬CRP的快速檢測方法不能依賴于人的商品化CRP快速檢測試紙條。目前，臨床中快速檢測犬CRP的方法多是依賴于臨床檢測儀器，這在普通寵物醫院并不具備。而且，對于動物疫病診斷行業，很多情況下，對于疾病的診斷需要在野外進行，這對于現行犬CRP檢測方法是沒有辦法完成的。時間分辨熒光免疫層析技術采用稀土元素(如Eu³⁺等)克服了熒光微球靈敏度較差的缺點。與放射性免疫分析相比，時間分辨熒光免疫層析技術無放射性污染，具有靈敏度高、抗基質干擾性好，穩定性強等優點。

中國專利ZL201710468614.6公開了一種犬C反應蛋白膠體金免疫層析試紙條，由樣品吸收墊、結合物釋放墊、反應膜、吸水墊、底板依次組成，所述結合物釋放墊上包被有鼠抗犬C反應蛋白單克隆抗體-膠體金標記物，所述反應膜上包括檢測區和質控區，所述檢測區包被有雞抗犬C反應蛋白多克隆抗體，所述質控區包被有羊抗鼠抗抗體。該方法選用了膠體金作為示蹤物，免疫標記物依靠靜電吸附，存在靈敏度較低、難以定量、重復性和穩定性較差等缺陷，無法完全滿足臨床的檢測需求。

中國專利ZL201710468621.6公開了一種犬C反應蛋白熒光檢測試紙條，由樣品吸收墊、結合物釋放墊、反應膜、吸水墊、底板依次組成，所述結合物釋放墊上包被有鼠抗犬C反應蛋白單克隆抗體-熒光微球標記物，所述反應膜上包括檢測區和質控區，所述檢測區包被有雞抗犬C反應蛋白多克隆抗體，所述質控區包被有羊抗鼠抗抗體；但是該方法存在下述缺點:檢測線包被抗體為多克隆抗體，可能會影響到檢測的特異性；另外反應膜檢測區和質控區發生免疫反應時，共用一種標記物：鼠抗犬C反應蛋白單克隆抗體-熒光微球標記物，當樣本中C反應蛋白變化是，C線熒光值將相應變化，從而可能影響C值和T/C值的穩定性，從而嚴重影響定量的準確性。

發明內容

針對上述問題，本發明的目的是提供一種靈敏度高，檢測結果重現性的用于檢測犬C-反應蛋白的免疫熒光層析檢測卡。

本發明的第二個目的是提供上述檢測試劑卡的制備方法。

為此，本申請提供的第一個技術方案是這樣的: