[發(fā)明專利]一種醫(yī)用生物敷料及其制備方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201810417695.1
• 申請日: 2018-05-04
• 公開（公告）號: CN109381731B
• 公開（公告）日: 2021-04-13
• 發(fā)明（設計）人: 史丙華;姜志華;苗雅娟
• 申請（專利權）人: 長沙海潤生物技術有限公司
• 主分類號: A61L15/40
• 分類號: A61L15/40;A61L15/42;A61L15/62;A61L15/32;A61L15/44
• 代理公司: 長沙正奇專利事務所有限責任公司 43113
• 代理人: 何為;李宇

1.一種醫(yī)用生物敷料的制備方法，其特征在于包括以下步驟：

(1)對大鯢皮膚進行剝離，得到全厚皮片；

(2)對所述全厚皮片進行超低溫冷凍處理；

(3)解凍后在緩沖液I中浸泡清洗1-3次，緩沖液I的有效成分為：L-抗壞血酸10-200mM，青鏈霉素混合液500ppm，無菌磷酸鹽緩沖鹽水；

(4)去除清洗后全厚皮片的表皮層和外周的真皮疏松結締組織，得到中間皮片；

(5)使用復合堿性清洗劑I和緩沖液II對中間皮片清洗1-3次，其中復合堿性清洗劑I的有效成分為：氫氧化鈉15-25mg/mL，助劑為：偏硅酸鈉30-60mg/mL，碳酸鈉15-30mg/mL；

(6)使用表面活性劑處理清洗后的中間皮片；

(7)使用固定劑I和固定劑II對經(jīng)步驟(6)處理的中間皮片進行固定處理，固定劑I有效成分為：含谷氨酰胺0.1-4mM的Hank's平衡鹽溶液；

(8)使用復合酶對經(jīng)步驟(7)處理的中間皮片的致密纖維層進行消化，復合酶的主要成分為：氯化鈉100-150mM，氯化鉀3-6mM，磷酸氫二鈉0.1-1.5mM，葡萄糖3-10mM，EDTA 0.5-3mM，胰蛋白酶0.01-5g/L，鏈霉蛋白酶0.01-5g/L，木瓜凝乳蛋白酶0.01-5g/L；

(9)使用漂白劑對經(jīng)步驟(8)處理的中間皮片進行漂白處理；

(10)將經(jīng)步驟(9)處理的中間皮片浸泡于含有葡聚糖5-15mM、蔗糖2-10mM、EDTA 0.5-3mM的冷凍保護液中，冷凍保存，即得。

2.根據(jù)權利要求1所述醫(yī)用生物敷料的制備方法，其特征在于，所述步驟(1)對大鯢皮膚剝離得到全厚皮片的方法為：對大鯢的皮膚進行初步清洗，去除表面分泌抗菌肽，使用取皮刀對大鯢軀干背側區(qū)域進行取皮操作，取皮厚度為1300-1500μm，包含全部表皮層、真皮層及皮下少量脂肪，然后將取下的皮片置入4℃的PBS中浸泡5－12分鐘，重復3次后吸去多余水分備用。

3.根據(jù)權利要求1所述醫(yī)用生物敷料的制備方法，其特征在于，所述步驟(2)超低溫冷凍處理的降溫速度為0.5-10℃/分鐘，冷凍溫度為-80至-196℃，冷凍時間為1-3小時。

4.根據(jù)權利要求1所述醫(yī)用生物敷料的制備方法，其特征在于，所述步驟(3)解凍的溫度為60-100℃；所述浸泡清洗的溫度為2-8℃，每次浸泡清洗時間為30-90分鐘。

5.根據(jù)權利要求1所述醫(yī)用生物敷料的制備方法，其特征在于，所述步驟(5)的緩沖液II有效成分為：氯化鈉100-150mM，氯化鉀3-6mM，硫酸鎂0.1-1.5mM，氯化鎂0.1-1.5mM，磷酸氫二鈉0.1-1.5mM，磷酸二氫鉀0.1-1.5mM，碳酸氫鈉2-6Mm。

6.根據(jù)權利要求1所述醫(yī)用生物敷料的制備方法，其特征在于，所述步驟(6)的表面活性劑為含有0.1-1％X-100的杜氏磷酸鹽緩沖液。

7.根據(jù)權利要求1所述醫(yī)用生物敷料的制備方法，其特征在于，所述步驟(7)的固定劑II有效成分為：含十二烷基硫酸鈉0.01-1％的Hank's平衡鹽溶液。

8.根據(jù)權利要求1所述醫(yī)用生物敷料的制備方法，其特征在于，所述步驟(7)的固定方法為：先將經(jīng)步驟(6)處理的中間皮片放入固定劑I中，以20-80rpm的速度水平搖床孵育5-15分鐘，倒去固定劑I，然后放入固定劑II中，以20-80rpm的速度搖床孵育30-90分鐘，固定溫度為15-25℃。

9.根據(jù)權利要求1所述醫(yī)用生物敷料的制備方法，其特征在于，所述步驟(8)的消化溫度為15-25℃，消化時間為15-20小時。

10.根據(jù)權利要求1所述醫(yī)用生物敷料的制備方法，其特征在于，所述步驟(9)所使用的漂白劑的主要成分為：過氧化氫1-5％，氫氧化鈉5-25g/L，EDTA 0.5-3mM。