[發(fā)明專(zhuān)利]一種銀杏內(nèi)酯注射液質(zhì)量檢測(cè)方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201810415895.3
• 申請(qǐng)日: 2018-05-03
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN108627503B
• 公開(kāi)（公告）日: 2021-03-02
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 趙軍寧;鄢良春;孫毅
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 四川省中醫(yī)藥科學(xué)院;成都百裕制藥股份有限公司
• 主分類(lèi)號(hào): G01N21/76
• 分類(lèi)號(hào): G01N21/76;G01N1/28;G01N1/38
• 代理公司: 成都高遠(yuǎn)知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 51222
• 代理人: 李高峽;張娟

本發(fā)明一種銀杏內(nèi)酯注射液的質(zhì)量檢測(cè)方法，步驟如下：a、取待檢銀杏內(nèi)酯注射液，用水稀釋?zhuān)♂屩馏w積百分比分別為25％、20％、15％、12％、8％、5％、2.5％、1％，再分別與20％氯化鈉溶液以17:3的體積比混合，制成待測(cè)樣品溶液；b、取費(fèi)氏弧菌，復(fù)蘇，得測(cè)試用菌液；c、以3％氯化鈉溶液為空白對(duì)照，將空白對(duì)照品和待測(cè)樣品溶液中加入測(cè)試用菌液，測(cè)定初始發(fā)光強(qiáng)度以及放置以后的發(fā)光強(qiáng)度，進(jìn)行數(shù)據(jù)處理，計(jì)算待檢銀杏內(nèi)酯注射液的IC₅₀值，即可。本發(fā)明方法可以有效檢測(cè)銀杏內(nèi)酯注射液的毒性，進(jìn)行質(zhì)量控制，應(yīng)用前景良好。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種銀杏內(nèi)酯注射液質(zhì)量檢測(cè)方法。

背景技術(shù)

銀杏內(nèi)酯注射液是由銀杏內(nèi)酯A、銀杏內(nèi)酯B、銀杏內(nèi)酯C和白果內(nèi)酯為主要成分制成的中藥注射劑，具有活血化瘀、通經(jīng)活絡(luò)等功效，用于治療中風(fēng)病中中經(jīng)絡(luò)(輕中度腦梗塞)恢復(fù)期淤阻血絡(luò)證，癥見(jiàn)半身不遂，口舌歪斜，言語(yǔ)謇澀，肢體麻木等。隨著銀杏內(nèi)酯注射液在臨床的廣泛使用，在其有效性得到認(rèn)同的同時(shí)，不良反應(yīng)報(bào)道也逐漸增多，以神經(jīng)系統(tǒng)損害、皮膚及其附件損害、血管損害和出凝血障礙等最為常見(jiàn)，近兩年亦有嚴(yán)重不良反應(yīng)的發(fā)生。

銀杏內(nèi)酯注射液按照現(xiàn)行藥典標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行質(zhì)量控制，完全達(dá)到檢測(cè)要求，但仍不能有效避免臨床應(yīng)用時(shí)不良反應(yīng)的發(fā)生，探索和應(yīng)用快速、敏感、可靠的新型毒性測(cè)試技術(shù)已經(jīng)成為中藥安全性評(píng)價(jià)領(lǐng)域的技術(shù)瓶頸和大勢(shì)所趨。因此，有必要引入新的方法輔助其質(zhì)量控制。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明將Microtox(微毒)技術(shù)運(yùn)用于銀杏內(nèi)酯注射液質(zhì)量控制檢測(cè)，為科學(xué)評(píng)價(jià)銀杏內(nèi)酯注射液的生物學(xué)毒性以及控制其質(zhì)量提供理論依據(jù)。

本發(fā)明銀杏內(nèi)酯注射液的質(zhì)量檢測(cè)方法，步驟如下：

a、取待檢銀杏內(nèi)酯注射液，用水稀釋?zhuān)♂屩馏w積百分比分別為25％、20％、15％、12％、8％、5％、2.5％、1％，再分別與20％氯化鈉溶液以17:3的體積比混合，制成待測(cè)樣品溶液；

b、取費(fèi)氏弧菌，復(fù)蘇，得測(cè)試用菌液；

c、以3％氯化鈉溶液為空白對(duì)照，將空白對(duì)照品和待測(cè)樣品溶液中加入測(cè)試用菌液，測(cè)定初始發(fā)光強(qiáng)度以及放置一定時(shí)間以后的發(fā)光強(qiáng)度，進(jìn)行數(shù)據(jù)處理，計(jì)算IC₅₀值，即可。

步驟b中，所述復(fù)蘇的方法是：

(1)取費(fèi)氏弧菌凍干粉，加入濃度為3％氯化鈉溶液，混勻，得菌液；

(2)將菌液稀釋?zhuān)科桨澹囵B(yǎng)，挑取發(fā)光單菌落；

(3)接種于液體培養(yǎng)基，培養(yǎng)至暗環(huán)境中肉眼可見(jiàn)藍(lán)綠熒光，得菌液；

(4)將菌液離心，去上清，用3％氯化鈉溶液重懸，放置15min，置于15℃預(yù)溫槽10min，即得測(cè)試用菌液，

步驟(1)中，取費(fèi)氏弧菌凍干粉，在15℃放置15min，加入3％氯化鈉溶液后，混勻；每1支CS234的費(fèi)氏弧菌凍干粉，加入1.0ml的氯離子濃度為3％的溶液。

步驟(2)中，菌液稀釋1000倍；培養(yǎng)的溫度為23.5℃，培養(yǎng)的時(shí)間為2～3天。

步驟(3)中，所述液體培養(yǎng)基每100ml含有如下成分：NaCl 3g，NaH₂PO₄·H₂O0.61g，K₂HPO₄·3H₂O 0.275g，MgSO₄·7H₂O 0.0204g，(NH₄)₂HPO₄ 0.05g，甘油0.3ml，胰蛋白胨0.25g，酵母浸出粉0.05g，其余為水。