[發明專利]一種活體單細胞原位切割方法及裝置

有效

• 申請號: 201810413114.7
• 申請日: 2018-05-03
• 公開（公告）號: CN108384718B
• 公開（公告）日: 2023-08-25
• 發明（設計）人: 林金明;毛思鋒;張強
• 申請（專利權）人: 清華大學
• 主分類號: C12M3/04
• 分類號: C12M3/04;C12M1/34;C12M1/33;C12N1/06
• 代理公司: 北京聿宏知識產權代理有限公司 11372
• 代理人: 吳大建;陳偉

1.一種貼壁活體單細胞原位切割裝置，其特征在于，所述裝置包括細胞操縱平臺、和位于所述細胞操縱平臺上方的微流體探針；其中，

所述微流體探針沿其圓周方向上依次設置有第一吸附管、細胞培養基溶液注入管、第二吸附管和細胞裂解液注入管，所述第一吸附管和所述第二吸附管相對設置，所述細胞培養基溶液注入管和所述細胞裂解液注入管相對設置，所述細胞培養基溶液注入管與所述第一吸附管和所述第二吸附管分別相鄰設置，所述細胞裂解液注入管與所述第一吸附管和所述第二吸附管分別相鄰設置；

所述第一吸附管、所述細胞培養基溶液注入管、所述第二吸附管和所述細胞裂解液注入管的下端為靠近待切割細胞的一端且均為錐形尖端，所述第一吸附管、所述細胞培養基溶液注入管、所述第二吸附管和所述細胞裂解液注入管的上端為遠離待切割細胞的一端；

所述第一吸附管和所述第二吸附管的上端連接液體吸收裝置，用于吸走待切割細胞培養裝置中的液體；

所述細胞培養基溶液注入管的上端連接液體注入裝置，用于向所述待切割細胞注入細胞培養基溶液；

所述細胞裂解液注入管的上端連接液體注入裝置，用于向所述待切割細胞注入細胞裂解液；

所述第一吸附管、所述細胞培養基溶液注入管、所述第二吸附管和所述細胞裂解液注入管的內徑為100～250微米；

所述第一吸附管、所述細胞培養基溶液注入管、所述第二吸附管和所述細胞裂解液注入管的尖端的直徑為25～100微米。

2.根據權利要求1所述的裝置，其特征在于，所述細胞操縱平臺包括：

載物臺；

位于所述載物臺上表面的細胞培養裝置，所述細胞培養裝置內盛裝有細胞培養基溶液，用于培養待切割細胞；

設置于所述載物臺下方的對準裝置，用于對待切割細胞進行觀察和定位。

3.根據權利要求2所述的裝置，其特征在于，所述第一吸附管、所述細胞培養基溶液注入管、所述第二吸附管和所述細胞裂解液注入管的內徑為250微米。

4.根據權利要求3所述的裝置，其特征在于，所述第一吸附管、所述細胞培養基溶液注入管、所述第二吸附管和所述細胞裂解液注入管的尖端的直徑為40微米。

5.根據權利要求3或4所述的裝置，其特征在于，所述微流體探針還包括用于固定微流體探針的支撐裝置和將所述支撐裝置連接在所述載物臺的移動裝置，所述移動裝置用于使所述支撐裝置在所述載物臺上移動，將所述第一吸附管、所述第二吸附管、所述細胞培養基溶液注入管和所述細胞裂解液注入管的尖端移動到所述待切割細胞的待切割部位。

6.一種貼壁活體單細胞原位切割方法，所述方法采用權利要求5所述的裝置，其特征在于，包括如下步驟：

1）在所述載物臺上的培養皿中培養所述待切割細胞，通過所述對準裝置進行觀察，通過調整所述載物臺和所述移動裝置使得所述待切割細胞的待切割部位位于所述微流體探針的下方正中央，所述微流體探針的尖端與所述待切割細胞之間保持5～100微米的距離；

2）通過所述細胞培養基溶液注入管和所述細胞裂解液注入管分別向所述待切割細胞同時注入細胞培養基溶液和細胞裂解液，并在持續注入細胞培養基溶液和細胞裂解液的同時通過所述第一吸附管和所述第二吸附管吸走細胞培養裝置中的液體；所述細胞培養基溶液和所述細胞裂解液的注入速度相同，吸走細胞培養裝置中的原有的細胞培養基的速度大于兩倍所述注入速度，使得所述待切割細胞周圍形成微區分布，所述微區包括截面積相等的細胞裂解液區域和細胞培養基區域，從而定向地裂解所述待切割細胞處于裂解液區域的部分，實現原位切割單個細胞的一部分。