[發明專利]單核細胞增生李斯特氏菌標準樣品及其制備方法

在審

• 申請號: 201810411606.2
• 申請日: 2018-05-02
• 公開（公告）號: CN108865922A
• 公開（公告）日: 2018-11-23
• 發明（設計）人: 唐靜;賈俊濤;黃小華;吳振興;方佩佩;林超;張曉良;趙麗青
• 申請（專利權）人: 山東出入境檢驗檢疫局檢驗檢疫技術中心
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;C12N1/04;C12R1/445;C12R1/01
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

本發明公開了一種單核細胞增生李斯特氏菌標準樣品及其制備方法，屬于微生物學檢測方面的質量控制領域。標準樣品包括目標菌和背景菌群，所述目標菌為單核細胞增生李斯特氏菌，所述背景菌群由英諾克李斯特氏菌，綿羊李斯特氏菌，金黃色葡萄球菌組成。本發明均勻性、穩定性符合標準樣品要求，可以最大程度保證測試樣品的穩定性，從滿足特殊運輸的條件著手，通過特殊工藝的研究、穩定性和均勻性的研究等形成一套完善的標準樣品制備技術，適合于制備符合標準樣品要求的豬肉中單核細胞增生李斯特氏菌標準樣品，適用于實驗室的能力驗證、質量控制、方法驗證等用途。

技術領域

本發明提供一種豬肉作為主要基質的單核細胞增生李斯特氏菌標準樣品及其制備方法，屬于微生物學檢測方面的質量控制領域。

背景技術

豬飼養簡易，豬肉又具有骨細筋少肉多的特點，是世界范圍內主要的肉類食品。豬肉富含蛋白質及脂肪、碳水化合物、鈣、鐵、磷等營養成分，經過烹調加工后肉味特別鮮美，是我國餐桌上重要的動物性食品之一。我國豬肉的主要消費形式是經過加工的冷鮮肉，由于豬肉營養物質和水分含量都比較高，所以很容易受到微生物的污染。在屠宰過程中，豬肉不可避免要攜帶來自環境和動物腸道、皮毛等部位的大量微生物，所以生產加工和儲藏過程中，如果處理不當很容易造成微生物的二次污染。受微生物污染的豬肉，如果攜帶致病菌，或者迅速繁殖，可能會對公眾健康構成潛在的威脅，因此，提高產品質量、加強豬肉微生物的檢測和控制對保障食品安全至關重要。

單核細胞增生李斯特氏菌(Listeria monocytogenes)簡稱單增李斯特菌，是一種人畜共患病的食源性致病菌，人類感染后主要表現為敗血癥、腦膜炎和單核細胞增多。它廣泛存在于自然界中，并且在4℃的條件下仍可生長繁殖，是威脅人類健康的主要病原菌之一，在食品衛生微生物檢驗中，必須加以重視。因此，制備單核細胞增生李斯特氏菌標準樣品，尤其是有合適食品基質的標準樣品對實驗室能力驗證、質量控制、方法驗證等都有深遠的意義。在單核細胞增生李斯特氏菌標準樣品中，如果目標菌易發生變化(繁殖或死亡等)，會導致標準樣品均勻性和穩定性較差，影響標準樣品的使用效果和保質期。因此，在制備豬肉中單核細胞增生李斯特氏菌標準樣品時，需要綜合考慮選用標準菌株的生化特性，凍干的工藝條件，凍干前對目標菌的低溫刺激和基質中保護劑的添加等交互的關系，以達到最佳的凍干效果。

單核細胞增生李斯特氏菌最常見的污染食品為肉及肉制品，豬肉是我國最主要肉食消費品，所以豬肉中單核細胞增生李斯特氏菌的檢測直接關系豬肉的衛生質量和致病風險。制備均勻性和穩定性良好的以豬肉為基質的單核細胞增生李斯特氏菌標準樣品，可以避免單核細胞增生李斯特氏菌檢驗的隨意性和不確定性，對實驗室進行能力驗證、方法驗證、儀器校準、測試結果的質量控制等都具有特殊重要的意義。

發明內容

本發明是將豬肉作為一種基質，向其中加入一定量的單核細胞增生李斯特氏菌標準菌株，經過一系列冷凍干燥的工藝處理，同時加入針對單核細胞增生李斯特氏菌的保藏干燥保護劑，制成豬肉中單核細胞增生李斯特氏菌標準樣品，目的是克服單核細胞增生李斯特氏菌標準樣品中目標菌的活菌數在運輸、儲藏和檢測等過程中容易發生變化的問題，提供一種均勻性、穩定性符合標準樣品要求的豬肉中單核細胞增生李斯特氏菌標準樣品，并確保該制備方法的工藝簡單可行，成功率高。

本發明為解決上述技術問題所采用的技術方案是：

本發明提供了一種單核細胞增生李斯特氏菌標準樣品，包括目標菌和背景菌群，所述目標菌為單核細胞增生李斯特氏菌，所述背景菌群由英諾克李斯特氏菌，綿羊李斯特氏菌，金黃色葡萄球菌組成。

本發明的標準樣品以豬肉、丙酮酸鈉、維生素C和無菌生理鹽水為基質，其中丙酮酸鈉的濃度為500mg/kg、維生素C的濃度為500mg/kg。在本領域中，標準樣品經常發生目標菌繁殖或死亡的現象，大大影響標準樣品的均勻性和穩定性。為克服該現象，本發明在基質中加入特制的干燥保護劑，濃度為500mg/kg。