[發明專利]一種胃蛋白酶原I（PGI）檢測試劑盒及其檢測方法

在審

• 申請號: 201810411567.6
• 申請日: 2018-05-02
• 公開（公告）號: CN108398555A
• 公開（公告）日: 2018-08-14
• 發明（設計）人: 劉光華;楊玉軍;劉秋明;許翠
• 申請（專利權）人: 廣州市伊川生物科技有限公司
• 主分類號: G01N33/573
• 分類號: G01N33/573;G01N33/68;G01N33/577;G01N21/31
• 代理公司: 北京華仲龍騰專利代理事務所(普通合伙) 11548
• 代理人: 李靜

1.一種胃蛋白酶原I(PGI)檢測試劑盒，其特征在于，包括試劑R1和R2；所述試劑R1包括：磷酸鹽緩沖液100mmoL/L、Proclinc 3000.5g/L、聚乙二醇600010g/L、曲拉通1001g/L、TRIS 10g/L；所述試劑R2包括：磷酸鹽緩沖液100mmoL/L、乳膠顆?？谷薖GI抗體結合乳液(抗人類胃蛋白酶原I(小鼠)單克隆抗體敏感的乳狀溶液1.3mg/mL)、Proclinc 3000.5g/L、小牛血清白蛋白(BSA)10g/L、穩定劑甘油90g/L。

2.根據權利要求1所述的一種胃蛋白酶原I(PGI)檢測試劑盒，其特征在于，所述試劑盒基于膠乳免疫比濁法進行制備，膠乳免疫比濁法的測定原理為：樣品中的PGI和被乳狀液粒吸附的抗體引起抗原抗體反應，形成免疫復合物，在700nm波長處檢測其濁度的變化，其變化程度與樣本中的PGI含量成正比。

3.根據權利要求1所述的一種胃蛋白酶原I(PGI)檢測試劑盒，其特征在于，所述試劑盒中助懸劑聚乙二醇6000的用量調整為10g/L。

4.根據權利要求1所述的一種胃蛋白酶原I(PGI)檢測試劑盒，其特征在于，所述試劑盒中表面活性劑曲拉通100的用量調整為1g/L。

5.根據權利要求1所述的一種胃蛋白酶原I(PGI)檢測試劑盒，其特征在于，所述試劑盒所涉及的試劑組分或儀器均為常規市售產品，或可通過本領域的常規技術手段獲得。

6.根據權利要求1所述的一種胃蛋白酶原I(PGI)檢測試劑盒，其特征在于，所述試劑R2中乳膠顆粒抗人PGI抗體結合乳液(抗人類胃蛋白酶原I(小鼠)單克隆抗體敏感的乳狀溶液)的制備方法如下：

S1：取2mL羧基化的膠乳微球(150nm，5％w/v)用磷酸鹽緩沖液至4ml；

S2：加入50ml 0.2g/L的N-羥基丁二酰亞胺(NHS)和50ml 0.2g/L的1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽(EDC)進行活化，攪拌均勻后37℃孵育20min；

S3：加入3mL磷酸鹽緩沖液10000rpm離心30min，除去上清液，以去除未反應完的NHS和EDC，然后用磷酸鹽緩沖液重懸顆粒；

S4：抗人類胃蛋白酶原I(小鼠)單克隆抗體的加入濃度以與聚苯乙烯膠乳微球顆粒的質量比為(0.2)：1的比例加入，37℃孵育4小時；

S5：加入3mL終止液終止反應，室溫下攪拌3小時后，4℃保存備用，終止液為含20％BSA的磷酸鹽緩沖液。

7.一種根據權利要求1所述的胃蛋白酶原I(PGI)檢測試劑盒的檢測方法，其特征在于，包括以下步驟：

S1：分離血清樣品，向血清樣品中加入試劑R1，混勻，孵育3-5min；

S2：加入試劑R2混勻孵育30s后，于700nm波長下檢測吸光度值A1；

S3：5min后，于700nm波長下檢測吸光度值A2；

S4：通過血清標準品數據計算胃蛋白酶原I的含量。

8.根據權利要求7所述的一種胃蛋白酶原I(PGI)檢測試劑盒的檢測方法，其特征在于，所述步驟S4中胃蛋白酶原I的含量數據計算包括：準確度分析、靈敏度分析、精密度分析、線性分析、穩定性分析以及穩定劑甘油在試劑中的用量考察分析。