[發明專利]一種胃蛋白酶原I（PGI）檢測試劑盒及其檢測方法

在審

• 申請號: 201810411567.6
• 申請日: 2018-05-02
• 公開（公告）號: CN108398555A
• 公開（公告）日: 2018-08-14
• 發明（設計）人: 劉光華;楊玉軍;劉秋明;許翠
• 申請（專利權）人: 廣州市伊川生物科技有限公司
• 主分類號: G01N33/573
• 分類號: G01N33/573;G01N33/68;G01N33/577;G01N21/31
• 代理公司: 北京華仲龍騰專利代理事務所(普通合伙) 11548
• 代理人: 李靜

本發明公開了一種胃蛋白酶原I(PGI)檢測試劑盒及其檢測方法，包括試劑R1和R2；試劑R1包括：磷酸鹽緩沖液100mmoL/L、Proclinc 300 0.5g/L、聚乙二醇6000 10g/L、曲拉通100 1g/L、TRIS 10g/L；試劑R2包括：磷酸鹽緩沖液100mmoL/L、乳膠顆粒抗人PGI抗體結合乳液(抗人類胃蛋白酶原I(小鼠)單克隆抗體敏感的乳狀溶液1.3mg/mL)、Proclinc 300 0.5g/L、小牛血清白蛋白(BSA)10g/L、甘油90g/L。其檢測方法包括如下步驟：分離血清樣品，向血清樣品中加入試劑R1，混勻，孵育3?5min后，加入R2混勻孵育30s后，于700nm波長下檢測吸光度值A1，5min后，于700nm波長下檢測吸光度值A2，通過血清標準品數據計算胃蛋白酶原I的含量，本發明顯著提高了測定試劑的靈敏度和穩定性，具有靈敏度高、精密度高、試劑穩定等特點。

技術領域

本發明涉及生物醫藥技術領域，具體為一種胃蛋白酶原I(PGI)檢測試劑盒及其檢測方法。

背景技術

胃蛋白酶原(Pepsinogen，PG)是胃液中胃蛋白酶的無活性前體，是分子量42000Da的單鏈多肽，在胃內轉變為具有活性的胃蛋白酶。根據生化性質、免疫原性、細胞來源及組織內分布，胃蛋白酶原可分成胃蛋白酶原I(PGI)、胃蛋白酶原Ⅱ(PGⅡ)兩個亞群：其中1～5組分免疫原性近似，稱為PGI(PGA)，主要由胃底腺的主細胞和頸粘液細胞分泌；6～7組分免疫原性近似，被稱為PGⅡ(PGC)，除由上述兩種細胞分泌外，幽門腺的黏液細胞、賁門腺以及十二指腸上段的Brunner腺也能產生PGⅡ，胃粘膜合成的PGⅡ約為總量的25％。

正常情況下，胃粘膜產生的胃蛋白酶原大部分進入胃腔，遇酸后肽鏈分解活化為胃蛋白酶，發揮其消化蛋白質的作用；小部分胃蛋白酶原則透過胃粘膜毛細血管進入血循環。血清胃蛋白酶原濃度可反映胃粘膜的分泌水平，不同胃蛋白酶原濃度水平也可反映不同部位胃粘膜的功能和形態變化。PGI是檢測胃泌酸腺細胞功能的指針，胃酸分泌增多PGI升高，分泌減少或胃粘膜腺體萎縮PGI降低。通過其血清測量值的不同，在各胃部疾病中均有不同程度的改變，為臨床提供可靠的診斷價值。

目前現有技術中，胃蛋白酶原I(PGI)的檢測方法包括酶聯免疫吸附測定(ELISA)、化學發光免疫分析法(CLIA)等。酶聯免疫吸附測定，該方法檢測靈敏度高但操作過程略顯復雜，測定時間較長，影響因素多，且不適合急診樣本的檢測；化學發光免疫分析法檢測，化學發光免疫分析包含兩個部分，即免疫反應系統和化學發光分析系統。將發光物質(在反應劑激發下生成激發態中間體)直接標記在抗原(化學發光免疫分析)或抗體(免疫化學發光分析)上，或酶作用于發光底物。該方法檢測可以自動化操作、精確度高但設備昂貴、穩定性較差。

發明內容

本發明的目的在于提供一種胃蛋白酶原I(PGI)檢測試劑盒及其檢測方法，通過特定的制備方法和優化反應體系顯著提高了測定試劑的靈敏度和穩定性，具有靈敏度高、精密度高、試劑穩定等優點，以解決上述背景技術中提出的問題。

為實現上述目的，本發明提供如下技術方案：一種胃蛋白酶原I(PGI)檢測試劑盒，包括試劑R1和R2；所述試劑R1包括：磷酸鹽緩沖液100mmoL/L、Proclinc3000.5g/L、聚乙二醇600010g/L、曲拉通1001g/L、TRIS 10g/L；所述試劑R2包括：磷酸鹽緩沖液100mmoL/L、乳膠顆粒抗人PGI抗體結合乳液(抗人類胃蛋白酶原I(小鼠)單克隆抗體敏感的乳狀溶液1.3mg/mL)、Proclinc 3000.5g/L、小牛血清白蛋白(BSA)10g/L、穩定劑甘油90g/L。

優選的，所述試劑盒基于膠乳免疫比濁法進行制備，膠乳免疫比濁法的測定原理為：樣品中的PGI和被乳狀液粒吸附的抗體引起抗原抗體反應，形成免疫復合物，在700nm波長處檢測其濁度的變化，其變化程度與樣本中的PGI含量成正比。

優選的，所述試劑盒中助懸劑聚乙二醇6000的用量調整為10g/L。