[發明專利]一種分離花生殼中手型圣草酚的方法及其應用

有效

• 申請號: 201810410701.0
• 申請日: 2018-05-02
• 公開（公告）號: CN108623548B
• 公開（公告）日: 2022-05-06
• 發明（設計）人: 徐蕾;高立娣;陳林;劉樹仁;王寧
• 申請（專利權）人: 齊齊哈爾大學
• 主分類號: C07D311/32
• 分類號: C07D311/32;C07D311/40;C07D311/30;A61P9/00;A61P11/00
• 代理公司: 哈爾濱龍科專利代理有限公司 23206
• 代理人: 高媛

1.一種分離花生殼中手性圣草酚的方法，其特征在于：所述的方法步驟如下：

步驟一：花生殼的處理：去雜、清洗、干燥，粉碎過篩；

步驟二：所述的花生殼粉末中加入15倍重量的60wt.%乙醇回流提取2次，1~2h/次，合并提取液；

步驟三：將步驟二中的提取液濃縮至原體積的60%，加入醋酸調節pH為5.5，加去離子水稀釋2~4倍，過0.10~0.20g藥材/mL樹脂柱，水快速洗脫除雜，再加入60~90wt.%乙醇洗脫并收集洗脫液，濃縮到原體積的20~50%，即得純化物；

步驟四：配制pH為8.0~9.0醋酸銨緩沖液，在配制好的緩沖液中加入MAH-β-CD混合、溶解、定容，每次使用前經濾膜過濾掉固體雜質，作為運行緩沖液；所述的MAH-β-CD的合成方法為稱取順丁烯二酸酐溶于二甲基甲酰胺中，常溫攪拌下加入β-CD，80℃±2℃恒溫水浴中反應8~12h，反應結束后，產物冷卻至室溫，用三氯甲烷沉淀出產物，丙酮充分洗滌，抽干，真空干燥，備用；

步驟五：將步驟三的純化物用濾膜過濾，過濾后使用毛細管電泳法進行異構體的拆分，分離電壓為20~30kV，運行緩沖溶液的pH為8.0~9.0，調節冷卻系統的實驗溫度為20~25℃，分別收集R構型體2R-圣草酚和S構型體的2S-圣草酚兩種圣草酚對映體；所述的毛細管為未涂層熔融石英毛細管柱。

2.根據權利要求1所述的一種分離花生殼中手性圣草酚的方法，其特征在于：步驟三中，所述的樹脂柱為HPD300、HPD500或HPD101。

3.根據權利要求1所述的一種分離花生殼中手性圣草酚的方法，其特征在于：所述的MAH-β-CD的合成方法為稱取5.0g順丁烯二酸酐溶于30mLDMF中，常溫攪拌下加入5.6gβ-CD，80℃恒溫水浴中反應10h，反應結束后，產物冷卻至室溫，用30mL三氯甲烷沉淀出產物，丙酮充分洗滌，抽干，80℃真空干燥24h，備用。

4.根據權利要求1所述的一種分離花生殼中手性圣草酚的方法，其特征在于：所述的未涂層熔融石英毛細管柱經過如下步驟活化：甲醇溶液沖洗10min；超純水沖洗10min；0.1mol/LHCl沖洗10min；超純水沖洗10min；0.1mol/LNaOH沖洗一夜；每天實驗開始前依次用0.1mol/LNaOH溶液沖洗10min、超純水沖洗10min，最后用運行緩沖液沖洗20min，兩次電泳運行間用運行緩沖溶液沖洗5min。

5.根據權利要求1所述的一種分離花生殼中手性圣草酚的方法，其特征在于：步驟四中，配制20mmol/L醋酸銨緩沖液，通過10mmol/L氨水及醋酸調節體系pH為8.0~9.0，按照緩沖液：MAH-β-CD=1：2的質量比在配置好的緩沖液中加入MAH-β-CD混合、溶解、定容，每次使用前經濾膜過濾掉固體雜質，作為運行緩沖液；步驟五中，所述的毛細管電泳法具體反應條件為：手性選擇劑為10~20mmol/LMAH-β-CD，分離電壓25kV，緩沖溶液pH為8.5，調節冷卻系統實驗溫度為25℃。

6.根據權利要求5所述的一種分離花生殼中手性圣草酚的方法，其特征在于：所述的手性選擇劑為15mmol/LMAH-β-CD。