[發(fā)明專利]一種H3N2亞型豬流感病毒株與疫苗株鑒別診斷的引物組及試劑盒

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201810410560.2
• 申請日: 2018-05-02
• 公開（公告）號: CN108315498A
• 公開（公告）日: 2018-07-24
• 發(fā)明（設計）人: 郭慶君;宋桂芹;邢樹杰;張清國
• 申請（專利權）人: 郭慶君;宋桂芹;邢樹杰;張清國
• 主分類號: C12Q1/70
• 分類號: C12Q1/70;C12Q1/686;C12N15/11;C12R1/93
• 代理公司: 廣州天河萬研知識產權代理事務所(普通合伙) 44418
• 代理人: 劉強;陳軒

本發(fā)明公開了一種H3N2亞型豬流感病毒株與疫苗株鑒別診斷的引物組及試劑盒，所述的引物組包括引物S1、S2和S3，其中：S1:5’?ACTTAGGCTAGCATCACATT?3’,S2：5’?CAATAAGCTGAGTCGACCGTATGG?3’，S3：5’?ATAAGCTTAGTCGACTGATT?3’。本發(fā)明根據H3N2亞型豬流感病毒株與疫苗株之間的差異，設計特異性引物S1、S2和S3，能夠對H3N2亞型豬流感病毒株與疫苗株進行特異性擴增。本發(fā)明的專用試劑盒具有很強的敏感性、特異性，且與病毒分離和IFA等方法相比符合率可達100％，能夠廣泛用于臨床H3N2亞型豬流感病毒株的鑒別診斷。

技術領域

本發(fā)明涉及獸醫(yī)生物病毒檢測技術領域，具體涉及一種H3N2亞型豬流感病毒株與疫苗株鑒別診斷的引物組及試劑盒。

背景技術

豬流感病毒(Swine influenza virus,SIV)有A、B、C型，其中A型SIV的危害最嚴重，H3N2亞型豬流感病毒是一種類人型流感病毒，可引起豬群發(fā)熱、厭食、倦怠、咳嗽、消瘦和呼吸困難等。該病的流行特征是突然發(fā)生，潛伏期短，迅速波及全群，感染率可達100％，多與豬藍耳病、豬傳染性胸膜肺炎、豬鏈球菌病等并發(fā)或繼發(fā)感染，使病情復雜化、嚴重化，導致豬死亡率急劇上升，給養(yǎng)殖業(yè)帶來巨大的經濟損失。建立一種能夠快速區(qū)分H3N2亞型豬流感病毒疫苗毒株與病毒株的多重PCR診斷方法和專用試劑盒，能夠方便在疫病發(fā)生早期快速、準確的診斷疫病，為疫病的防控提供有效的參考。

發(fā)明內容

有鑒于此，本發(fā)明的目的在于提供一種H3N2亞型豬流感病毒株與疫苗株鑒別診斷的引物組及試劑盒，該試劑盒能夠快速區(qū)分H3N2亞型豬流感病毒株與疫苗株。

為了實現上述目的，本發(fā)明所采用的技術方案是：

一種H3N2亞型豬流感病毒株與疫苗株鑒別診斷的引物組，所述的引物組包括引物S1、S2、S3，其中：

S1：5’-ACTTAGGCTAGCATCACATT-3’；

S2：5’-CAATAAGCTGAGTCGACCGTATGG-3’；

S3：5’-ATAAGCTTAGTCGACTGATT-3’。

一種所述的引物組在制備H3N2亞型豬流感病毒株與疫苗株鑒別診斷試劑盒中的應用。

一種所述的引物組的H3N2亞型豬流感病毒株與疫苗株鑒別診斷試劑盒。

所述的試劑盒還包括核酸提取試劑、反轉錄試劑、PCR擴增試劑、和/或瓊脂糖凝膠電泳試劑。

所述的反轉錄試劑包括10×M-MLV緩沖液、dNTP、M-MLV反轉錄酶、RNase酶抑制劑、S2引物。

所述的PCR擴增試劑包括10×PCR擴增緩沖液、dNTP、S1引物、S2引物、Taq DNA聚合酶和雙蒸水。

所述的PCR擴增試劑所構建的PCR擴增體系為：10×PCR擴增緩沖液5.0μL、2.5mmol/L dNTP8.0μL、10mmol/L S1引物1.0μL、10mmol/L S2引物1.0μL、5U/μL Taq DNA聚合酶1.0μL、模板3.0μL，補加雙蒸水至50μL。

一種所述的試劑盒的使用方法，包括核酸提取、反轉錄、PCR擴增和瓊脂糖凝膠電泳。

還包括對瓊脂糖凝膠電泳的結果進行分析：當擴增片段為1700bp，則樣本中的H3N2亞型豬流感病毒為疫苗株；當擴增片段大小為1400bp，則樣本中的H3N2亞型豬流感病毒為病毒株。

所述的PCR擴增條件為：95℃預變性5min；94℃變性30s，57℃退火30s，72℃延伸90s，共35個循環(huán)；最后72℃延伸10min。

本發(fā)明的有益效果：