[發明專利]一種H3N2亞型豬流感病毒株與疫苗株鑒別診斷的引物組及試劑盒

在審

• 申請號: 201810410560.2
• 申請日: 2018-05-02
• 公開（公告）號: CN108315498A
• 公開（公告）日: 2018-07-24
• 發明（設計）人: 郭慶君;宋桂芹;邢樹杰;張清國
• 申請（專利權）人: 郭慶君;宋桂芹;邢樹杰;張清國
• 主分類號: C12Q1/70
• 分類號: C12Q1/70;C12Q1/686;C12N15/11;C12R1/93
• 代理公司: 廣州天河萬研知識產權代理事務所(普通合伙) 44418
• 代理人: 劉強;陳軒

1.一種H3N2亞型豬流感病毒株與疫苗株鑒別診斷的引物組，其特征在于，所述的引物組包括S1、S2、S3，其中：

S1：5’-ACTTAGGCTAGCATCACATT-3’；

S2：5’-CAATAAGCTGAGTCGACCGTATGG-3’；

S3：5’-ATAAGCTTAGTCGACTGATT-3’。

2.一種如權利要求1所述的引物組在制備H3N2亞型豬流感病毒株與疫苗株鑒別診斷試劑盒中的應用。

3.一種包含如權利要求1所述的引物組的H3N2亞型豬流感病毒株與疫苗株鑒別診斷試劑盒。

4.根據權利要求3所述的試劑盒，其特征在于，所述的試劑盒還包括核酸提取試劑、反轉錄試劑、PCR擴增試劑、和/或瓊脂糖凝膠電泳試劑。

5.根據權利要求4所述的試劑盒，其特征在于，所述的反轉錄試劑包括10×M-MLV緩沖液、dNTP、M-MLV反轉錄酶、RNase酶抑制劑、S2引物。

6.根據權利要求4所述的試劑盒，其特征在于，所述的PCR擴增試劑包括10×PCR擴增緩沖液、dNTP、S1引物、S2引物、Taq DNA聚合酶和雙蒸水。

7.根據權利要求6所述的試劑盒，其特征在于，所述的PCR擴增試劑所構建的PCR擴增體系為：10×PCR擴增緩沖液5.0μL、2.5mmol/L dNTP8.0μL、10mmol/L S1引物1.0μL、10mmol/LS2引物1.0μL、5U/μL Taq DNA聚合酶1.0μL、模板3.0μL，補加雙蒸水至50μL。

8.一種如權利要求3-7任一項所述的試劑盒的使用方法，其特征在于，包括核酸提取、反轉錄、PCR擴增和瓊脂糖凝膠電泳。

9.根據權利要求8所述的試劑盒的使用方法，其特征在于，還包括對瓊脂糖凝膠電泳的結果進行分析：當擴增片段為1700bp，則樣本中的H3N2亞型豬流感病毒為疫苗株；當擴增片段大小為1400bp，則樣本中的H3N2亞型豬流感病毒為病毒株。

10.根據權利要求8所述的試劑盒的使用方法，其特征在于，所述的PCR擴增條件為：95℃預變性5min；94℃變性30s，57℃退火30s，72℃延伸90s，共35個循環；最后72℃延伸10min。