[發(fā)明專利]聯(lián)合Aβ和D-gal構(gòu)建的AD模型鼠海馬區(qū)基因表達(dá)差異譜及其測定方法和應(yīng)用

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• 申請?zhí)枺?/td>: 201810410013.4
• 申請日: 2018-05-02
• 公開（公告）號: CN108588214A
• 公開（公告）日: 2018-09-28
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 黃飛娟;吳正治;秦鑒
• 申請（專利權(quán)）人: 中山大學(xué)附屬第一醫(yī)院
• 主分類號: C12Q1/6883
• 分類號: C12Q1/6883;G06F19/18;A01K67/027
• 代理公司: 北京品源專利代理有限公司 11332
• 代理人: 鞏克棟

本發(fā)明涉及一種聯(lián)合Aβ和D?gal構(gòu)建的AD模型鼠海馬區(qū)差異基因表達(dá)圖譜的構(gòu)建方法，包括：1)用Aβ和D?gal處理大鼠，以建立AD模型鼠；2)用Morris水迷宮測量AD模型鼠的記憶損傷，以確定AD模型鼠的成功構(gòu)建；3)獲取AD模型組與正常對照組的海馬區(qū)樣本，對各所述測試海馬區(qū)基因表達(dá)分別獲取基因芯片數(shù)據(jù)；4)各基因芯片數(shù)據(jù)上傳到基因芯片數(shù)據(jù)分析軟件，獲取差異表達(dá)基因，篩選AD模型鼠差異表達(dá)的基因譜；5)對差異表達(dá)的基因進(jìn)行功能注釋分類和生物通路分析，以揭示與AD發(fā)生的相關(guān)分子基礎(chǔ)。本發(fā)明將Aβ和D?gal作為整體AD模型來研究其基因表達(dá)譜，有效避免了由外源基因誘導(dǎo)的其他改變表達(dá)的錯(cuò)誤。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于生物技術(shù)領(lǐng)域，涉及一種AD模型鼠海馬區(qū)基因表達(dá)差異譜的測定方法，具體涉及聯(lián)合A_β和D-gal構(gòu)建的AD模型鼠海馬區(qū)基因表達(dá)差異譜及其測定方法和應(yīng)用。

背景技術(shù)

阿爾茨海默病(AD)是以認(rèn)知能力下降和記憶力缺陷為特征的最為普遍的與年齡相關(guān)進(jìn)行性神經(jīng)退行性疾病，約占所有老年認(rèn)知功能障礙患者的2/3。雖然AD對患者的行為造成破壞性影響并最終對其生命構(gòu)成嚴(yán)重威脅，但基于大腦皮質(zhì)中存在細(xì)胞內(nèi)神經(jīng)原纖維纏結(jié)(NFT)以及在海馬區(qū)細(xì)胞外淀粉樣斑塊(APs)的臨床病理學(xué)診斷僅適用于AD中度和終末階段。目前，AD病例在初期很少被診斷出來。最近，利用代謝組學(xué)、蛋白質(zhì)組學(xué)和基因組學(xué)技術(shù)監(jiān)測整個(gè)AD發(fā)展過程中的分子擾動，以篩選診斷治療靶標(biāo)的生物標(biāo)志物。

據(jù)報(bào)道，長期給予D-半乳糖(D-gal)可以誘發(fā)行為和神經(jīng)化學(xué)變化，這些變化被應(yīng)用于模擬腦老化自然過程。同時(shí)，β淀粉樣蛋白(Aβ)是阿爾茨海默病(AD)的關(guān)鍵病理標(biāo)志，并且在該疾病的進(jìn)展過程中起關(guān)鍵作用。因此，D-gal和Aβ被廣泛用于誘導(dǎo)AD、AD樣模型研究、AD的作用機(jī)制和篩選抗AD藥物。先前的研究表明，D-gal和Aβ聯(lián)合誘導(dǎo)大鼠可更接近AD患者的行為與神經(jīng)化學(xué)變化。

基因芯片是同時(shí)測量數(shù)千個(gè)mRNA表達(dá)的方便且強(qiáng)大的工具。已有研究報(bào)道利用基因芯片分析的方法，探索和識別與疾病或異常疾病相關(guān)的新型分子靶點(diǎn)。

“逍遙散對阿爾茨海默病模型大鼠海馬mRNA表達(dá)的影響，李高申等，中國老年學(xué)雜志2015年8月第35卷，4199-4201”公開了一種用AD模型鼠探討逍遙散對阿爾茨海默病的海馬mRNA表達(dá)的影響，涉及D-gal腹腔注射和Aβ_1-42雙側(cè)海馬注射聯(lián)合造模，實(shí)驗(yàn)鼠經(jīng)給藥處理后剝離其海馬，提取RNA并進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄，運(yùn)用實(shí)時(shí)定量PCR的方法檢測mRNA表達(dá)變化，該方法構(gòu)建的大鼠模型與阿爾茨海默病的行為變化相似，但實(shí)時(shí)定量PCR在檢測mRNA表達(dá)差異時(shí)費(fèi)時(shí)費(fèi)力，樣本量小，不利于挖掘基因差異表達(dá)譜。

“應(yīng)用基因芯片篩選β淀粉樣蛋白誘導(dǎo)的阿爾茨海默病細(xì)胞模型差異表達(dá)基因，郭秋野，第一軍醫(yī)大學(xué)，2006”公開了一種利用基因芯片研究阿爾茨海默病相關(guān)基因表達(dá)差異的方法，涉及用Aβ_25-35誘導(dǎo)構(gòu)建AD細(xì)胞模型，運(yùn)用基因芯片篩選該模型與未經(jīng)誘導(dǎo)的對照細(xì)胞間的差異表達(dá)基因，分析差異基因的功能，實(shí)現(xiàn)高通量檢測。但所用模型為細(xì)胞模型，體外實(shí)驗(yàn)不能精準(zhǔn)代表體內(nèi)變化，且單一使用Aβ_25-35誘導(dǎo)效果不穩(wěn)定。

因此，建立一種高度模擬阿爾茨海默病行為變化的實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ停ΡM可能多的基因進(jìn)行差異表達(dá)分析，得到差異表達(dá)分析譜，在生物技術(shù)領(lǐng)域具有重要意義和廣闊運(yùn)用前景。

發(fā)明內(nèi)容

針對現(xiàn)有技術(shù)的不足及實(shí)際的需求，本發(fā)明提供聯(lián)合A_β和D-gal構(gòu)建的AD模型鼠海馬區(qū)基因表達(dá)差異譜及其測定方法和應(yīng)用，將Aβ和D-gal作為整體AD模型來研究其基因表達(dá)譜，有效避免了由外源基因誘導(dǎo)的其他改變表達(dá)的錯(cuò)誤。

為達(dá)此目的，本發(fā)明采用以下技術(shù)方案：

第一方面，本發(fā)明提供一種聯(lián)合Aβ和D-gal構(gòu)建的AD模型鼠海馬區(qū)基因表達(dá)差異譜的測定方法，所述方法包括以下步驟：