[發明專利]聯合Aβ和D-gal構建的AD模型鼠海馬區基因表達差異譜及其測定方法和應用

在審

• 申請號: 201810410013.4
• 申請日: 2018-05-02
• 公開（公告）號: CN108588214A
• 公開（公告）日: 2018-09-28
• 發明（設計）人: 黃飛娟;吳正治;秦鑒
• 申請（專利權）人: 中山大學附屬第一醫院
• 主分類號: C12Q1/6883
• 分類號: C12Q1/6883;G06F19/18;A01K67/027
• 代理公司: 北京品源專利代理有限公司 11332
• 代理人: 鞏克棟

1.一種聯合Aβ和D-gal構建的AD模型鼠海馬區基因表達差異譜的測定方法，其特征在于，所述方法包括以下步驟：

依次用Aβ和D-gal處理大鼠，以建立AD模型鼠；用Morris水迷宮測量AD模型鼠的記憶相關行為，以確定AD模型鼠的成功建立；用基因芯片獲取基因表達數據，并與正常組對照，篩選AD模型鼠差異表達的基因，構建AD模型鼠海馬區基因表達差異譜；最后，對差異表達的基因進行功能注釋分類和生物通路分析。

2.根據權利要求1所述的聯合Aβ和D-gal構建的AD模型鼠海馬區基因表達差異譜的測定方法，其特征在于，所述方法包括以下步驟：

(1)建立AD模型鼠：在大鼠腦室內注射老化的淀粉狀蛋白肽Aβ_25-35；兩周后，每天在大鼠皮下注射D-半乳糖，持續50天；建立AD模型鼠；

(2)行為學表征分析：在建立AD模型鼠14天后，在Morris水迷宮中測量AD模型鼠的記憶相關行為，驗證AD模型鼠的學習記憶損傷；

(3)基因芯片分析：提取AD模型鼠雙側海馬組織的總RNA，利用基因芯片獲取AD模型鼠及正常組雙側海馬組織的基因表達數據，兩組數據對照，篩選出差異表達的基因，構建AD模型鼠海馬區基因表達差異譜；

(4)功能注釋分類和生物通路分析：利用PANTHER分類系統和DAVID生物信息資源的注釋功能將差異表達的基因進行分類和功能注釋；

(5)綜合步驟(2)和步驟(4)的結果，研究AD的分子基礎以及AD病理機制。

3.根據權利要求2所述的聯合Aβ和D-gal構建的AD模型鼠海馬區基因表達差異譜的測定方法，其特征在于，步驟(1)中，老化的淀粉狀蛋白肽Aβ_25-35的濃度為1-10μg/μl，優選為2-8μg/μl；

優選地，老化的淀粉狀蛋白肽Aβ_25-35的用量為2-10μl，優選為4-6μl；

優選地，在大鼠腦室內注射老化的淀粉狀蛋白肽Aβ_25-35后，用青霉素處理3-5天；

優選地，青霉素的用量為1-8×10⁴U/天，優選為2-6×10⁴U/天；

優選地，D-半乳糖的濃度為100-200mg/kg，優選為130-180mg/kg；

優選地，D-半乳糖的用量為100-200mg，優選為130-180mg。

4.根據權利要求2或3所述的聯合Aβ和D-gal構建的AD模型鼠海馬區基因表達差異譜的測定方法，其特征在于，步驟(2)中，隨機將若干AD模型鼠放入Morris水迷宮中，讓AD模型鼠尋找安全逃離的平臺；如果AD模型鼠在60s內沒有找到所述平臺，就將其引導到所述平臺上并停留10-20s；間隔8-15min后，將AD模型鼠放回Morris水迷宮中；連續訓練3-7天，每天3-5次，同時記錄AD模型鼠從Morris水迷宮中逃逸到平臺的時間；

將平臺從Morris水迷宮中移出，將AD模型鼠從平臺位置對面的象限中釋放，并自由游泳50-80s，測量AD模型鼠在平臺位置所在的目標象限中花費的時間和游泳距離。