[發(fā)明專利]多重標(biāo)簽串聯(lián)的DNA序列及其在蛋白質(zhì)表達(dá)純化系統(tǒng)的應(yīng)用

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201810404013.3
• 申請(qǐng)日: 2018-04-28
• 公開（公告）號(hào): CN110408636B
• 公開（公告）日: 2021-07-30
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 郭敏;徐開;章小鈴;周子鑒;江丹;李海洋;于雪
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 康碼（上海）生物科技有限公司
• 主分類號(hào): C12N15/62
• 分類號(hào): C12N15/62;C12N5/10;C07K19/00;C07K7/08
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本發(fā)明提供了一種多重標(biāo)簽串聯(lián)的DNA序列及其在蛋白質(zhì)表達(dá)純化系統(tǒng)的應(yīng)用，具體地，本發(fā)明提供了一種核酸構(gòu)建物，所述核酸構(gòu)建物具有從5’至3’的式I結(jié)構(gòu)：Z1?Z2?Z3?Z4?Z5 (I)；式中，Z1－Z5分別為用于構(gòu)成所述構(gòu)建物的元件；各“?”獨(dú)立地為鍵或核苷酸連接序列；Z1為前導(dǎo)肽的編碼序列；Z2為無或泛素的編碼序列；Z3為標(biāo)簽蛋白的編碼序列；Z4為連接序列；Z5為無或外源蛋白的編碼序列。本發(fā)明的核酸構(gòu)建物可顯著提高外源蛋白合成的效率，并簡(jiǎn)化目標(biāo)外源蛋白的表達(dá)與純化過程。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及生物技術(shù)領(lǐng)域，具體地，涉及多重標(biāo)簽串聯(lián)的DNA序列及其在 蛋白質(zhì)表達(dá)純化系統(tǒng)的應(yīng)用。

背景技術(shù)

蛋白質(zhì)是細(xì)胞中的重要分子，幾乎參與了細(xì)胞所有功能的執(zhí)行。蛋白的序 列和結(jié)構(gòu)不同，決定了其功能的不同[1]。在細(xì)胞內(nèi)，蛋白可以作為酶類催化 各種生化反應(yīng)，可以作為信號(hào)分子協(xié)調(diào)生物體的各種活動(dòng)，可以支持生物形態(tài)， 儲(chǔ)存能量，運(yùn)輸分子，并使生物體運(yùn)動(dòng)[1]。在生物醫(yī)學(xué)領(lǐng)域，蛋白質(zhì)抗體作 為靶向藥物，是治療癌癥等疾病的重要手段[1,2]。

在從酵母到人類的細(xì)胞內(nèi)都發(fā)現(xiàn)了一些翻譯增強(qiáng)編碼序列和用于蛋白表達(dá)純 化的親和序列，而針對(duì)細(xì)胞內(nèi)源的這些元件的研究并不充分，主要是因?yàn)榧?xì)胞內(nèi)源 性元件的作用受別的細(xì)胞作用因子等因素的影響，會(huì)影響起始蛋白質(zhì)翻譯的效率， 而且在純化過程中容易發(fā)生非特異性結(jié)合[3,4]。不同于病毒中表達(dá)蛋白較為簡(jiǎn)單, 不同的細(xì)胞內(nèi)源性表達(dá)蛋白不具有序列和結(jié)構(gòu)上的共性，通常很難進(jìn)行高通量具有 共性的翻譯增強(qiáng)編碼序列和用于蛋白表達(dá)純化的親和序列進(jìn)行表達(dá)純化[3,4]。

在體外合成所使用的DNA模板通常不具有多標(biāo)簽串聯(lián)元件，而對(duì)不同的蛋白 進(jìn)行設(shè)計(jì)不同的標(biāo)簽和純化方法時(shí)間和成本都相對(duì)較高[5]。而目前使用真核細(xì)胞 多標(biāo)簽串聯(lián)元件在體外起始蛋白質(zhì)的表達(dá)與純化的應(yīng)用還比較少。

因此，本領(lǐng)域迫切需要開發(fā)一種可提升目標(biāo)蛋白的表達(dá)效率并可用于蛋白質(zhì) 表達(dá)純化的DNA序列。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于提供一種可提升目標(biāo)蛋白的表達(dá)效率并可用于蛋白質(zhì) 表達(dá)純化的DNA序列。

本發(fā)明第一方面提供了一種核酸構(gòu)建物，所述核酸構(gòu)建物具有從5’至3’ 的式I結(jié)構(gòu)：

Z1-Z2-Z3-Z4-Z5 (I)

式中，

Z1－Z5分別為用于構(gòu)成所述構(gòu)建物的元件；

各“-”獨(dú)立地為鍵或核苷酸連接序列；

Z1為前導(dǎo)肽的編碼序列；

Z2為無或泛素的編碼序列；

Z3為標(biāo)簽蛋白的編碼序列；

Z4為連接序列；

Z5為無或外源蛋白的編碼序列；

其中，所述前導(dǎo)肽的編碼序列選自下組：

(a)編碼如SEQ ID NO.:2所示多肽(前導(dǎo)肽的氨基酸序列： ITETSSPFRSIFSHSGK)的多核苷酸；

(b)序列如SEQ ID NO.:1所示的多核苷酸；

(c)核苷酸序列與SEQ ID NO.:1所示序列的同源性≥75％(較佳地≥85％，更佳地≥90％或≥95％或≥98％或≥99％)的多核苷酸；

(d)在SEQ ID NO.:1所示多核苷酸的5'端和/或3'端截短或添加1-60個(gè)(較 佳地1-30，更佳地1-10個(gè))核苷酸的多核苷酸；

(e)與(a)-(d)任一所述的多核苷酸互補(bǔ)的多核苷酸。