[發明專利]多重標簽串聯的DNA序列及其在蛋白質表達純化系統的應用

有效

• 申請號: 201810404013.3
• 申請日: 2018-04-28
• 公開（公告）號: CN110408636B
• 公開（公告）日: 2021-07-30
• 發明（設計）人: 郭敏;徐開;章小鈴;周子鑒;江丹;李海洋;于雪
• 申請（專利權）人: 康碼（上海）生物科技有限公司
• 主分類號: C12N15/62
• 分類號: C12N15/62;C12N5/10;C07K19/00;C07K7/08
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1.一種核酸構建物，其特征在于，所述核酸構建物具有從5’至3’的式I結構：

Z1-Z2-Z3-Z4-Z5 (I)

式中，

Z1－Z5分別為用于構成所述構建物的元件；

各“-”獨立地為鍵或核苷酸連接序列；

Z1為前導肽的編碼序列；

Z2為無；

Z3為標簽蛋白的編碼序列，所述標簽蛋白選自下組： 8His、鏈霉親和素STN及其組合8His-STN；

Z4為連接序列；

Z5為無或外源蛋白的編碼序列；

其中，所述前導肽的編碼序列選自下組：

(a) 序列如SEQ ID NO:1所示的多核苷酸；和

(b) 與(a)所述的多核苷酸互補的多核苷酸；

其中，所述鏈霉親和素的序列選自下組：

(a) 編碼如SEQ ID NO:6所示多肽的多核苷酸；

(b) 序列如SEQ ID NO:5或8所示的多核苷酸；

(c) 與(a)或(b)所述的多核苷酸互補的多核苷酸；

其中，所述連接序列選自下組：

(i) 序列如SEQ ID NO:7或9所示的多核苷酸；和

(ii) 與(i)所述的多核苷酸互補的多核苷酸。

2.如權利要求1所述的核酸構建物，其特征在于，所述Z5為增強型綠色熒光蛋白的編碼序列。

3.一種載體或載體組合，其特征在于，所述的載體或載體組合含有權利要求1所述的核酸構建物。

4.一種基因工程細胞，其特征在于，所述基因工程細胞的基因組的一個或多個位點整合有權利要求1所述的構建物，或者所述基因工程細胞中含有權利要求3所述的載體或載體組合。

5.一種試劑盒，其特征在于，所述試劑盒中包含的試劑選自下組中的一種或多種：

(a) 權利要求1所述的構建物；

(b) 權利要求3所述的載體或載體組合；和

(c) 權利要求4所述的基因工程細胞。

6.一種如權利要求1所述的構建物、權利要求3所述的載體或載體組合、權利要求4所述的基因工程細胞或權利要求5所述試劑盒的用途，其特征在于，用于進行高通量的體外蛋白合成。

7.一種體外高通量的外源蛋白合成方法，其特征在于，包括步驟：

(i) 在真核體外生物合成體系存在下，提供權利要求1所述的核酸構建物；

(ii) 在適合的條件下，孵育步驟(i)的真核體外生物合成體系一段時間T1，從而合成所述外源蛋白。

8.如權利要求7所述的方法，其特征在于，所述方法還包括：(iii)從所述真核體外生物合成體系中，分離或檢測所述外源蛋白。

9.一種分離的多核苷酸，其特征在于，所述多核苷酸選自下組：

(a) 編碼如SEQ ID NO:2所示多肽的多核苷酸；

(b) 序列如SEQ ID NO:1所示的多核苷酸；和

(c) 與(a)或(b)所述的多核苷酸互補的多核苷酸。

10.一種前導肽，其特征在于，所述前導肽為SEQ ID NO:2所示氨基酸序列的多肽。