[發明專利]細胞分析法檢測低密度脂蛋白受體相關蛋白4抗體在審
| 申請號： | 201810403072.9 | 申請日： | 2018-04-28 |
| 公開（公告）號： | CN108845134A | 公開（公告）日： | 2018-11-20 |
| 發明（設計）人： | 楚蘭;李媛;張藝凡;賀電;蔡剛 | 申請（專利權）人： | 楚蘭;李媛;張藝凡;賀電;蔡剛 |
| 主分類號： | G01N33/68 | 分類號： | G01N33/68 |
| 代理公司： | 北京酷愛智慧知識產權代理有限公司 11514 | 代理人： | 安娜 |
| 地址： | 550000 貴*** | 國省代碼： | 貴州;52 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 低密度脂蛋白受體相關蛋白 細胞分析 重組質粒 抗體 檢測 重癥肌無力 開放閱讀框架 真核表達載體 重組質粒轉染 熒光顯微鏡 表達細胞 抗原抗體 細胞固定 攜帶 孵育 構建 質粒 封閉 觀察 | ||
1.一種檢測低密度脂蛋白受體相關蛋白的方法，其特征在于，包括步驟：
構建重組質粒；
將所述重組質粒轉染培養好的HEK293T細胞，得到攜帶重組質粒的HEK293T細胞；
將所述攜帶重組質粒的HEK293T細胞依次進行培養、細胞固定、封閉和孵育，然后采用熒光顯微鏡進行觀察，檢測出低密度脂蛋白受體相關蛋白。
2.根據權利要求1所述的檢測低密度脂蛋白受體相關蛋白的方法，其特征在于：
所述重組質粒，是采用pReceiver-M98質粒，構建出用EGFP標記LRP4的完整開放閱讀框架的真核表達載體。
3.根據權利要求1所述的檢測低密度脂蛋白受體相關蛋白的方法，其特征在于，
所述培養具體包括步驟：將經多聚賴氨酸處理的細胞爬片置于24孔細胞培養板中，然后加入所述攜帶重組質粒的HEK293T細胞進行培養。
4.根據權利要求1所述的檢測低密度脂蛋白受體相關蛋白的方法，其特征在于：
所述細胞固定是當攜帶重組質粒的HEK293T細胞的密度為70％～80％時，采用4％多聚甲醛固定液進行固定。
5.根據權利要求4所述的檢測低密度脂蛋白受體相關蛋白的方法，其特征在于：
所述細胞固定的時間為16～20min。
6.根據權利要求1所述的檢測低密度脂蛋白受體相關蛋白的方法，其特征在于：
所述封閉采用的封閉液是含質量分數為5％的羊血清白蛋白的PBS溶液。
7.根據權利要求1所述的檢測低密度脂蛋白受體相關蛋白的方法，其特征在于：
所述封閉的時間為2.5～3.0h。
8.根據權利要求1所述的檢測低密度脂蛋白受體相關蛋白的方法，其特征在于：
所述孵育包括一抗孵育和熒光二抗孵育。
9.根據權利要求8所述的檢測低密度脂蛋白受體相關蛋白的方法，其特征在于：
所述一抗孵育是采用稀釋的待測血清孵育過夜；所述孵育的溫度為4℃；所述稀釋是根據封閉液倍增稀釋法進行。
10.根據權利要求8所述的檢測低密度脂蛋白受體相關蛋白的方法，其特征在于：
所述熒光二抗孵育是采用Alex568標記的山羊抗人IgG避光室溫孵育2.5～3.0h。
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