[發明專利]一種高通量篩選分離蘇云金芽胞桿菌的方法和應用有效
| 申請號： | 201810402728.5 | 申請日： | 2018-04-28 |
| 公開（公告）號： | CN108611296B | 公開（公告）日： | 2020-08-11 |
| 發明（設計）人： | 王奮山;姚英娟;劉子榮;徐雪亮;劉小娟;曾紹民 | 申請（專利權）人： | 江西省農業科學院農業應用微生物研究所(江西省農村能源研究中心) |
| 主分類號： | C12N1/20 | 分類號： | C12N1/20;C12N1/02;C12R1/07 |
| 代理公司： | 武漢宇晨專利事務所 42001 | 代理人： | 龔瑩瑩 |
| 地址： | 330200 江西*** | 國省代碼： | 江西;36 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 通量 篩選 分離 蘇云金芽胞 桿菌 方法 應用 | ||
1.一種高通量篩選分離蘇云金芽胞桿菌的方法，包括如下步驟：
步驟一，選擇性芽胞化培養：將樣品懸液涂布在選擇性芽胞化培養基的平板上，28-30℃培養3-5天，使其中的Bt細胞選擇性擴繁并最終芽胞化；
步驟二，選擇性萌發抑制培養和高溫處理：將所述平板上的培養物收集并制備成芽胞懸液，接種到選擇性萌發抑制培養基中，28-30℃搖床培養4-8小時，使大部分雜菌萌發生長，然后通過65-80℃處理30-60分鐘；
步驟三，選擇性富集培養：將上述高溫處理后的培養物涂布在選擇性富集培養基的平板上，28-30℃培養12-18h，使其長出肉眼可見的單菌落，隨機挑取至少12個單菌落，轉接到新的選擇性富集培養基的平板上，28-30℃培養3-5天至芽胞期；
步驟四，鏡檢篩選和分離：將所述芽胞化的菌落進行制片鏡檢，篩選出含有伴胞晶體的菌落，即為分離的Bt菌株；
所述的選擇性芽胞化培養基，包括：碳酸鈣0.05-0.2g/L，氯化錳0.02-0.08mM，pH6.8的磷酸鈉緩沖液0.03-0.1M，瓊脂粉15-20g/L，pH值6.0-7.5；
所述的選擇性萌發抑制培養基，包括：氯化鈉7.5-15g/L，胰蛋白胨7.5-15g/L，酵母浸粉3.5-7.5g/L，乙酸鈉15-35g/L，乙酸鉀3.0-7.5g/L，丙三醇2-8ml/L，pH值6.0-7.5；
所述的選擇性富集培養基，包括：胰蛋白胨3.5-7.5g/L，酵母浸粉1.0-2.0g/L，碳酸鈣0.05-0.2g/L，氯化錳0.02-0.08mM，pH6.8的磷酸鈉緩沖液0.03-0.1M，葡萄糖3.0-7.5g/L，瓊脂粉15-20g/L，pH值6.0-7.5。
2.根據權利要求1所述的方法，其特征在于：
所述的選擇性芽胞化培養基，包括：碳酸鈣0.1g/L，氯化錳0.04mM，磷酸鈉緩沖液0.05M，瓊脂粉18g/L，pH值6.8；
所述的選擇性萌發抑制培養基，包括：氯化鈉10g/L，胰蛋白胨10g/L，酵母浸粉5g/L，乙酸鈉24.61g/L，乙酸鉀4.91g/L，丙三醇4ml/L，pH值6.8；
所述的選擇性富集培養基，包括：胰蛋白胨5g/L，酵母浸粉1.5g/L，碳酸鈣0.1g/L，氯化錳0.04mM，磷酸鈉緩沖液0.05M，葡萄糖5g/L，瓊脂粉18g/L，pH值6.8。
3.權利要求1所述的方法在篩選或分離蘇云金芽胞桿菌中的應用。
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