[發(fā)明專利]重組全人源抗破傷風(fēng)毒素單克隆抗體

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201810401688.2
• 申請日: 2018-04-28
• 公開（公告）號: CN108586611B
• 公開（公告）日: 2021-01-26
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 廖化新;袁曉輝;王月明;鄭偉宏
• 申請（專利權(quán)）人: 暨南大學(xué);珠海泰諾麥博生物技術(shù)有限公司;廣州泰諾迪生物科技有限公司
• 主分類號: C07K16/12
• 分類號: C07K16/12;C12N15/13;C12N15/70;C12N1/21;G01N33/577;G01N33/569;A61K39/395;A61P31/04
• 代理公司: 北京品源專利代理有限公司 11332
• 代理人: 鞏克棟

本發(fā)明提供了一種重組全人源抗破傷風(fēng)毒素單克隆抗體，所述單克隆抗體的重鏈CDR的氨基酸序列如SEQ ID NO.1?3所示；所述抗體的輕鏈CDR的氨基酸序列如SEQ ID NO.4?6所示。本發(fā)明的中和抗體無免疫原性、特異性好、親和力高、成分清晰、無病原體污染等潛在風(fēng)險，廣泛適用于各種人群，所述制備方法簡單高效、適于標(biāo)準(zhǔn)化生產(chǎn)。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于細胞免疫學(xué)領(lǐng)域，涉及重組全人源抗破傷風(fēng)毒素單克隆抗體。

背景技術(shù)

破傷風(fēng)(Tetanus)是由于感染破傷風(fēng)梭狀芽孢桿菌(clostridiumtetani)而引起的急性、致死性的人畜共患神經(jīng)系統(tǒng)疾病。破傷風(fēng)梭狀芽孢桿菌廣泛存在于人、畜的腸道和土壤中，人群攜帶率高達25％，不同類型和大小的傷口均可成為破傷風(fēng)梭狀芽孢桿菌入侵的門戶。當(dāng)人被感染后，潛伏期內(nèi)破傷風(fēng)梭狀芽孢桿菌在厭氧條件下于創(chuàng)口處大量繁殖并釋放毒素，破傷風(fēng)毒素通過破壞人體神經(jīng)細胞而侵害中樞神經(jīng)系統(tǒng)，導(dǎo)致機體痙攣、四肢強直、角弓反張等癥狀，最終使人因窒息或呼吸衰竭而死亡。在戰(zhàn)爭爆發(fā)和自然災(zāi)害頻發(fā)時期，破傷風(fēng)成為一項嚴(yán)峻的公共衛(wèi)生問題，任何年齡人群均可能發(fā)生破傷風(fēng)感染，死亡率為20-30％，重癥患者以及新生兒的死亡率高達80％。

破傷風(fēng)毒素作用迅速，毒性很強。當(dāng)患者被確診為感染破傷風(fēng)桿菌后，體內(nèi)一般已存在大量細菌和毒素，使用抗菌素已不能挽救患者生命。預(yù)防和治療破傷風(fēng)的唯一有效的方法是及時注射抗破傷風(fēng)毒素抗體中和毒素，并通過抗體受體的介導(dǎo)將毒素從體內(nèi)清除。近年來出現(xiàn)越來越多關(guān)于人-鼠嵌合、人源和全人源抗破傷風(fēng)毒素單克隆抗體的報道。利用B細胞篩選抗體工程技術(shù)對全人源單克隆抗體進行改造制備的基因工程抗體不僅消除了血清蛋白引起的過敏反應(yīng)，而且克服了人源免疫球蛋白生產(chǎn)過程的弊端，具有較好的發(fā)展前景。采用基因重組技術(shù)，在基因水平上對抗體分子進行改造，形成嵌合抗體，即將鼠抗可變區(qū)基因與人IgG恒定區(qū)鏈接；人源化抗體，即將鼠抗可變區(qū)的互補決定區(qū)移植入人IgG的骨架區(qū)中，進一步降低了鼠抗引起的免疫反應(yīng)；完全人源抗體，該類抗體不含任何外來基因，不會造成過敏反應(yīng)，是目前基因工程抗體研究的熱點之一。然而這些報道的抗體雖然能夠與破傷風(fēng)毒素結(jié)合，但中和毒素的效價不高，且抗體的產(chǎn)業(yè)化生產(chǎn)問題尚未解決。

因此，利用先進的技術(shù)，制備一種高效安全的抗破傷風(fēng)毒素單克隆抗體具有重要意義。

發(fā)明內(nèi)容

為了彌補現(xiàn)有技術(shù)的不足，本發(fā)明為了彌補現(xiàn)有技術(shù)的不足，本發(fā)明主要目的在于提供一種無免疫原性、親和力高、特異性強、效價高的針對破傷風(fēng)毒素的全人源單克隆抗體，以及編碼的序列片段，生產(chǎn)的細胞株和應(yīng)用進行診斷、預(yù)防或治療的方法和用途。本發(fā)明提供的抗體可廣泛適用于各種人群，所述制備方法簡單高效、適于標(biāo)準(zhǔn)化生產(chǎn)。

第一方面，本發(fā)明提供了一種重組全人源抗破傷風(fēng)毒素單克隆中和抗體，所述抗體包括選自下列的重鏈可變區(qū)(VH):

(1)如SEQ ID NO.1所示的VH CDR1；

(2)如SEQ ID NO.2所示的VH CDR2；和

(3)如SEQ ID NO.3所示的VH CDR3；

所述抗體包括選自下列的輕鏈可變區(qū)(VL):

(1)如SEQ ID NO.4所示的VL CDR1；

(2)如SEQ ID NO.5所示的VL CDR2；和

(3)如SEQ ID NO.6所示的VL CDR3；

進一步，所述的抗體的重鏈可變區(qū)(VH)的氨基酸序列如SEQ ID NO.7所示；和/或

輕鏈可變區(qū)(VL)的氨基酸序列如SEQ ID NO.8所示。

進一步，所述抗體包含重鏈恒定區(qū)和/或抗體輕鏈恒定區(qū)的全部或者部分。