[發(fā)明專利]一種動(dòng)物胃腸道線蟲幼蟲孵化與收集方法

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201810401665.1
• 申請(qǐng)日: 2018-04-28
• 公開（公告）號(hào): CN108812551A
• 公開（公告）日: 2018-11-16
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 王敏;韓天龍;張廣和;王麗萍;張艷明;李曉龍;趙婧辛;樊建花;羿靜;王燕春
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 赤峰市農(nóng)牧科學(xué)研究院
• 主分類號(hào): A01K67/033
• 分類號(hào): A01K67/033
• 代理公司: 赤峰市專利事務(wù)所 15103
• 代理人: 周東進(jìn)

1.一種動(dòng)物胃腸道線蟲幼蟲孵化與收集方法，其特征在于，采用如下步驟：

1、糞樣采集：選取4個(gè)月以上未驅(qū)蟲的目標(biāo)動(dòng)物，通過直腸無(wú)菌采集新鮮糞便，裝入無(wú)菌樣本袋內(nèi)；將采集到的糞便于2-8 ℃運(yùn)輸并保存，72 h內(nèi)進(jìn)行糞便蟲卵收集處理；

2、濾除糞渣：稱取20 g糞便樣本放入潔凈三角瓶中，用玻璃棒將糞便搗碎，加入10倍重量的滅菌蒸餾水，放入玻璃珠，反復(fù)旋搖三角瓶，使糞便充分破碎并釋放蟲卵；用40目篩濾除糞渣，再用滅菌蒸餾水將蟲卵從糞渣充分洗入濾液中，收集濾液；

3、一次沉淀：將收集的濾液分裝于50 ml離心管中，1500 r/min 離心4 min或靜置20h，使蟲卵沉淀到離心管底部，棄上清；

4、蟲卵漂浮：在沉淀中加入飽和食鹽水至50ml刻度，漩渦震蕩15 s，靜置10 min，1000r/min 離心4 min，靜置5 min，立即用1000 μl移液器，與液面呈45°角，槍頭口一半露出于液面上，帶氣吸取液面表層漂浮物；每50 ml吸取5 ml，分別轉(zhuǎn)移入各個(gè)新離心管內(nèi)；

5、二次沉淀：于各個(gè)新離心管中加入40 ml滅菌蒸餾水，1000 r/min 離心4 min，使大部分蟲卵沉淀到離心管底部，用移液器從上至下慢慢地吸取25 ml上層液體棄掉，吸取時(shí)使槍頭剛剛浸入液面下即可；

6、三次沉淀：加入25 ml滅菌蒸餾水，1500 r/min 離心4 min，使蟲卵沉淀到離心管底部，棄上清；

7、蟲卵孵化：按照體積比滅菌蒸餾水和Earle’s液1:1的比例配制平衡液，根據(jù)實(shí)際需要調(diào)整蟲卵濃度，于各個(gè)新離心管中加入5-10 ml平衡液，混勻并分裝于24孔板內(nèi)，于28-32℃，相對(duì)濕度70-80%下孵化；

8、幼蟲收集：恒溫安靜孵化48 h后，在倒置顯微鏡下觀察蟲卵孵化情況，每隔12 h觀察一次，孵化出的大多數(shù)幼蟲沉淀在24孔板底部，根據(jù)需要，能直接收集各期幼蟲。