[發(fā)明專利]一種快速提取棉花纖維DNA的方法及其應(yīng)用在審
| 申請?zhí)枺?/td> | 201810401271.6 | 申請日： | 2018-04-28 |
| 公開（公告）號： | CN108546701A | 公開（公告）日： | 2018-09-18 |
| 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人： | 馬磊;田新權(quán);徐雙嬌;方丹;時萌 | 申請（專利權(quán)）人： | 中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院棉花研究所 |
| 主分類號： | C12N15/10 | 分類號： | C12N15/10;C12Q1/6806 |
| 代理公司： | 北京眾合誠成知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11246 | 代理人： | 夏艷 |
| 地址： | 455000 河*** | 國省代碼： | 河南;41 |
| 權(quán)利要求書： | 查看更多 | 說明書： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 棉花纖維 快速提取 常規(guī)PCR 纖維 分子標(biāo)記輔助選擇 應(yīng)用 重要農(nóng)藝性狀 多次離心 棉花品種 基因 裂解液 棉纖維 擴(kuò)增 裂解 打碎 溯源 沉淀 耗時 育種 棉花 成熟 研究 | ||
1.一種快速提取棉花纖維DNA的方法，其特征在于，包括以下步驟：
1)將棉花纖維充分剪碎后用液氮研磨；
2)加入細(xì)胞裂解液充分混合，水浴30分鐘；
3)加入等體積抽提液離心后，取上清加入-20℃預(yù)冷異丙醇，緩慢顛倒離心管直至有沉淀析出，-20℃靜置20分鐘；
4)離心棄掉上清液；
5)加入70％乙醇水溶液，離心棄掉上清液，重復(fù)2～3次；
6)加入無水乙醇離心，棄掉廢液，室溫晾置；
7)加入無菌水，4℃保存。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種快速提取棉花纖維DNA的方法，其特征在于，步驟(2)中所述的細(xì)胞裂解液為：Tris 100mmol/L、EDTA 10mmol/L、CTAB 20g/L、PVP-30 20g/L、Tween2020g/L、NaCl 1mol/L、β-巰基乙醇2％(v/v)，調(diào)pH至8.0。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種快速提取棉花纖維DNA的方法，其特征在于，步驟(2)中水浴溫度保持在65℃。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種快速提取棉花纖維DNA的方法，其特征在于，步驟(3)所述的抽提液為氯仿和異戊醇按照體積比為24:1配置得到。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種快速提取棉花纖維DNA的方法，其特征在于，步驟(3)中預(yù)冷異丙醇的添加量為0.6倍體積。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種快速提取棉花纖維DNA的方法，其特征在于，所述的離心條件均為：12000rpm，4℃。
7.權(quán)利要求1所述的快速提取棉花纖維DNA的方法在棉花品種分子標(biāo)記中的應(yīng)用。
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