[發(fā)明專利]一種用于石榴干腐病菌LAMP快速檢測的引物組合物及其應(yīng)用

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201810390017.0
• 申請日: 2018-04-27
• 公開（公告）號: CN108315391B
• 公開（公告）日: 2021-10-22
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 楊雪;陳雨;谷春艷;臧昊昱
• 申請（專利權(quán)）人: 安徽省農(nóng)業(yè)科學(xué)院植物保護(hù)與農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全研究所
• 主分類號: C12Q1/6844
• 分類號: C12Q1/6844;C12Q1/6895;C12Q1/04;C12N15/11
• 代理公司: 廣州市華學(xué)知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 44245
• 代理人: 高寧馨

本發(fā)明公開了一種用于石榴干腐病菌LAMP快速檢測的引物組合物及其應(yīng)用。本發(fā)明的引物組合物，由以下引物組成：F3、B3、BIP、FIP。利用該引物組合物進(jìn)行石榴干腐病菌的LAMP快速檢測，特異性強(qiáng)、靈敏度高，因此，本發(fā)明所述的引物組合物可在檢測和/或鑒定石榴干腐病菌中應(yīng)用，為科學(xué)研究和生產(chǎn)實(shí)踐提供了一種簡便、快速、成本低廉的檢測技術(shù)，也為石榴干腐病菌的早期預(yù)警及合理用藥提供了理論基礎(chǔ)和技術(shù)指導(dǎo)，對增加生態(tài)社會和經(jīng)濟(jì)效益都具有現(xiàn)實(shí)而深遠(yuǎn)的意義。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及農(nóng)作物病害檢測鑒定技術(shù)和分子生物學(xué)技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種用于石榴干腐病菌LAMP快速檢測的引物組合物及其應(yīng)用。

背景技術(shù)

石榴干腐病病原菌屬于半知菌亞門，鮮殼孢菌屬真菌。分生孢子器球形或扁球形，分生孢子菱形，深黃色，常與黏液粘在一起。僵果上的菌絲在翌年4月中旬前后產(chǎn)生新的孢子器，成為此病的傳播源。在我國多個(gè)省份均有發(fā)生，嚴(yán)重影響我國石榴生產(chǎn)和糧食安全。為了阻止石榴干腐病傳播范圍的不斷擴(kuò)大，對其進(jìn)行快速、準(zhǔn)確地檢測鑒定尤為重要。

近年來隨著分子生物學(xué)相關(guān)技術(shù)的發(fā)展，基于PCR的方法已經(jīng)成功用于檢測石榴干腐病菌，盡管以PCR為基礎(chǔ)的分子鑒定方法一定程度上克服了傳統(tǒng)形態(tài)鑒定上的缺陷，但由于檢測需要PCR儀、凝膠電泳和成像系統(tǒng)儀等昂貴的專業(yè)儀器設(shè)備，同時(shí)需要操作人員具有一定的分子生物學(xué)專業(yè)技能，并且只能在實(shí)驗(yàn)室條件下完成，需要較長的時(shí)間，檢測過程復(fù)雜，不能滿足快速檢測的需求，限制了PCR檢測方法在生產(chǎn)中的推廣應(yīng)用。

環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增技術(shù)(Loop‐mediated isothermal amplification，LAMP)是Notomi等開發(fā)的一種恒溫?cái)U(kuò)增方法，該方法針對靶基因的6個(gè)位點(diǎn)設(shè)計(jì)出4條引物，利用一種具有鏈?zhǔn)街脫Q活性的DNA聚合酶(Bst DNApolymerase)，在恒溫條件下(60℃左右)保溫30-90分鐘，即可完成擴(kuò)增反應(yīng)。由于該反應(yīng)過程中產(chǎn)生焦磷酸鎂沉淀物，出現(xiàn)渾濁沉淀，因此用肉眼就判定擴(kuò)增結(jié)果，也可通過向其擴(kuò)增產(chǎn)物中添加熒光染料通過顏色變化來判斷，因此不需要專業(yè)的儀器設(shè)備，在普通水浴鍋中或者其他穩(wěn)定熱源即可完成，具有簡單、快速、高效、經(jīng)濟(jì)等特征。憑借快速靈敏的優(yōu)越性，LAMP技術(shù)已在多種花卉、植物、農(nóng)作物常見病蟲害的快速檢測中得到了應(yīng)用，極大的提高了針對植物病蟲害的鑒定效率和準(zhǔn)確率，為進(jìn)一步采取適宜的防控措施控制其危害提供了便利，但目前在石榴干腐病菌的檢測中尚無相關(guān)報(bào)道。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明提供了一種用于石榴干腐病菌LAMP快速檢測的引物組合物。

本發(fā)明還提供該引物組合物的應(yīng)用。

本發(fā)明進(jìn)一步提供一種石榴干腐病菌LAMP快速檢測方法。

本發(fā)明采用的技術(shù)方案如下：

一種用于石榴干腐病菌LAMP快速檢測的引物組合物，其特征在于，由F3、 B3、FIP和BIP四條引物組成，所述引物F3、B3、FIP和BIP的核苷酸序列分別如下所示：

F3：5’-GGTCACCGTGACTTCATCAA-3’；

B3：5’-CCTTCCACTCAGCAGTGTC-3’；

FIP：5’-CACCAGTACCGGAGGCAATGATCATGATCACTGGTACCTCGC -3’；

BIP：5’-GCTGGTATCTCCAAGGATGGCCACGATGAGCTGCTTGACAC -3’。

本發(fā)明的LAMP引物組合物在制備石榴干腐病菌檢測試劑中的應(yīng)用。

本發(fā)明的LAMP引物組合物在檢測和/或鑒定石榴干腐病菌中的應(yīng)用。

一種用于檢測石榴干腐病菌的試劑，包含本發(fā)明的引物組合物。

一種石榴干腐病菌LAMP快速檢測方法，包括以下步驟：