[發(fā)明專利]一種用于石榴干腐病菌LAMP快速檢測(cè)的引物組合物及其應(yīng)用

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201810390017.0
• 申請(qǐng)日: 2018-04-27
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN108315391B
• 公開(kāi)（公告）日: 2021-10-22
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 楊雪;陳雨;谷春艷;臧昊昱
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 安徽省農(nóng)業(yè)科學(xué)院植物保護(hù)與農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全研究所
• 主分類號(hào): C12Q1/6844
• 分類號(hào): C12Q1/6844;C12Q1/6895;C12Q1/04;C12N15/11
• 代理公司: 廣州市華學(xué)知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 44245
• 代理人: 高寧馨

1.一種用于石榴干腐病菌LAMP快速檢測(cè)的引物組合物，其特征在于，由F3、B3、FIP和BIP四條引物組成，所述引物F3、B3、FIP和BIP的核苷酸序列分別如下所示：

F3：5’-GGTCACCGTGACTTCATCAA-3’；

B3：5’-CCTTCCACTCAGCAGTGTC-3’；

FIP：5’-CACCAGTACCGGAGGCAATGATCATGATCACTGGTACCTCGC-3’；

BIP：5’-GCTGGTATCTCCAAGGATGGCCACGATGAGCTGCTTGACAC-3’。

2.權(quán)利要求1所述的LAMP引物組合物在制備石榴干腐病菌檢測(cè)試劑中的應(yīng)用。

3.權(quán)利要求1所述的LAMP引物組合物在檢測(cè)和/或鑒定石榴干腐病菌中的應(yīng)用。

4.一種用于檢測(cè)石榴干腐病菌的試劑，其特征在于包含權(quán)利要求1所述的引物組合物。

5.一種石榴干腐病菌LAMP快速檢測(cè)方法，其特征在于包括以下步驟：

(1)提取待檢樣品DNA，采用CTAB法提取待檢樣品的DNA；

(2)以提取的DNA為模板，利用權(quán)利要求1所述的LAMP引物組合物進(jìn)行LAMP擴(kuò)增；

(3)LAMP擴(kuò)增反應(yīng)結(jié)束按照以下任意一種方式觀察結(jié)果：

1)向擴(kuò)增產(chǎn)物中加入顯色劑，輕晃混勻，即可觀察顏色變化，擴(kuò)增產(chǎn)物顯示為黃綠色，表明待測(cè)樣品中含有石榴干腐病菌；擴(kuò)增產(chǎn)物顯示為橙紅色，表明待測(cè)樣品中不含有石榴干腐病菌；

2)取擴(kuò)增產(chǎn)物在2％瓊脂糖凝膠電泳中電泳，觀察擴(kuò)增結(jié)果，如果LAMP擴(kuò)增產(chǎn)物的電泳圖譜為梯狀條帶，表明含有石榴干腐病菌；如果擴(kuò)增產(chǎn)物的電泳圖譜無(wú)擴(kuò)增條帶，表明不含有石榴干腐病菌：

所述的顯色劑為SYBR Green I。

6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的檢測(cè)方法，其特征在于步驟(2)所述LAMP擴(kuò)增的反應(yīng)體系為20μL，由下列濃度體積的組分組成：

用無(wú)菌雙蒸水補(bǔ)充擴(kuò)增體系體積到20μL。

7.根據(jù)權(quán)利要求5所述的檢測(cè)方法，其特征在于步驟(2)所述LAMP擴(kuò)增的反應(yīng)條件為：65℃保溫60min。