[發明專利]一種基于PRET的磷光探針定量檢測凝血酶的方法

有效

• 申請號: 201810388864.3
• 申請日: 2018-04-27
• 公開（公告）號: CN108760695B
• 公開（公告）日: 2021-08-03
• 發明（設計）人: 張菲;熊艷;邱蕊;李妍
• 申請（專利權）人: 天津師范大學
• 主分類號: G01N21/64
• 分類號: G01N21/64;G01N33/573;G01N33/86
• 代理公司: 天津市杰盈專利代理有限公司 12207
• 代理人: 朱紅星

1.一種基于PRET的磷光探針定量檢測凝血酶的方法，其特征在于按如下的步驟進行：

（1）制備的磷光QDs材料均勻分散在水溶液中配制成濃度為500 mg/L的溶液作為檢測體系，并使用315 nm作為激發波長，測試體系在590 nm處的磷光發射峰；所述的磷光QDs材料指的是MPA包覆的Mn摻雜ZnS量子點；

（2）將TBA-BHQ2溶液加入到步驟（1）的溶液中并混合均勻，靜置以確保兩者的相互作用，從而形成QDs/TBA-BHQ2復合物溶液，其中TBA-BHQ2的濃度0.1 μmol/L；

（3）待測凝血酶溶液TB加入到步驟（2）的復合物溶液中并混合均勻，靜置以確保分析物與QDs/TBA-BHQ2復合物相互作用，以形成TB/TBA-BHQ2復合物；

（4）步驟（2）對磷光量子點探針的磷光進行猝滅，步驟（3）對量子點的磷光進行恢復，并以步驟（1）的檢測條件分別對步驟（2）和步驟（3）中形成的復合溶液進行檢測，得到磷光恢復響應值，檢測樣品中凝血酶的濃度；

（5）分別將不同生物分子加入加到步驟（2）所得到QDs/TBA-BHQ2復合物溶液中，混合均勻，靜置待反應體系穩定后，進行磷光測試，考察其選擇性識別能力；所述的不同生物分子指的是L-半胱氨酸、甘氨酸、L-組氨酸、L-亮氨酸、L-蛋氨酸、L-蘇氨酸或溶菌酶。

2.權利要求1所述的基于PRET的磷光探針定量檢測凝血酶的方法，其中所述凝血酶樣品須溶解于自制生理鹽水中，自制生理鹽水配方為：稱取0.8克氯化鈉，溶解在少量高純水中，稀釋到100毫升，高純水須用0.45 μm水系膜過濾。

3.按權利要求1或權利要求2所述的基于PRET的磷光探針定量檢測凝血酶的方法，在水溶液樣品中檢測凝血酶的線性范圍0.08-7.5 nmol/L，檢出限為0.023nmol/L。